滾環(huán)擴增(rolling circle amplification,RCA)是一種基于病毒DNA復制而發(fā)明的新技術(shù)。近些年,RCA技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)的檢測。在miRNA檢測研究領(lǐng)域中,鑒別高度同源的家族miRNAs成為該研究領(lǐng)域的瓶頸。本研究引入新型的RCA技術(shù)來增加鑒別的靈敏度和特異性,進一步提高家族miRNA鑒別的靈敏度,滾環(huán)擴增的程度用相對熒光強度來表示。研究結(jié)果顯示,T4 RNA連接酶2可在RCA的環(huán)化過程中實現(xiàn)最大的環(huán)化效率,從而提高RCA的檢測特異性。本文利用優(yōu)化的RCA技術(shù),實現(xiàn)對let 7高度同源的家族miRNAs高靈敏度的鑒別,靈敏度可達5 fmol。let 7a的滾環(huán)探針對Let 7a這一miRNA擴增后的相對熒光強度為1 550,而對其他的家族miRNA相對熒光強度僅為260。其他的家族miRNA探針在鑒別時相對熒光強度也顯示了較大的差異。而依靠傳統(tǒng)的RT-qPCR方法的鑒別靈敏度是4 pmol,與本研究相比,靈敏度低了近1 000倍。本研究的結(jié)果表明,利用RCA技術(shù)鑒別高度同源性miRNA...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 寡核酸序列
        1.1.2 試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 滾環(huán)擴增檢測
    1.3 環(huán)化
    1.4 滾環(huán)擴增
    1.5 實時定量PCR檢測miRNAs
    1.6 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 RCA方法實現(xiàn)鑒別家族miRNA
        2.1.1 Let 7a的鑒別
        2.1.2 let 7b、let 7c、let 7 d、let 7e的鑒別
    2.2 RCA鑒別let 7a的高靈敏度
3 討論
    3.1 RCA技術(shù)的檢測應(yīng)用
    3.2 利用RCA方法鑒別let 7家族miRNAs
    3.3 重要研究結(jié)果
        3.3.1 SYBR GreenⅡ熒光檢測
        3.3.2 應(yīng)用滾環(huán)擴增反應(yīng)檢測微小RNA(miRNA)
        3.3.3 利用滾環(huán)擴增方法鑒別高度同源的miRNAs



本文編號：3873343