發(fā)布時間：2023-11-07 19:55

　　構(gòu)建菠蘿(Ananas comosus(Linn.) Merr.)質(zhì)膜水通道蛋白基因(AcPIP1∶2)原核表達載體和體外轉(zhuǎn)錄載體,為制備AcPIP1∶2抗體和含有Poly(A)+的AcPIP1∶2轉(zhuǎn)錄子奠定基礎(chǔ).以菠蘿果實為試驗材料,提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA.以cDNA為模板,根據(jù)GenBank中公布的AcPIP1∶2全長cDNA序列(登錄號:XM₀20229679.1)設(shè)計合成特異性引物進行PCR擴增,獲得AcPIP1∶2開放閱讀框(ORF)序列.序列分析表明,獲得的AcPIP1∶2序列與GenBank中公布的序列一致,序列長度為867 bp.該序列經(jīng)Hind III和Xho I雙酶切后亞克隆至原核表達載體pET32a(+),酶切、測序表明,成功構(gòu)建了重組載體pET32a(+)-AcPIP1∶2.將pET32a(+)-AcPIP1∶2轉(zhuǎn)到大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)中表達,結(jié)果表明,異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)產(chǎn)生分子量為50 ku的融合蛋白.該序列經(jīng)Hind III和Xba I雙酶切后亞克隆至載體pSP64 Poly(A)中,酶切、測序表明...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 菠蘿果實總RNA質(zhì)量的檢測
    2.2 AcPIP1-2 ORF序列的擴增
    2.3 AcPIP1∶2 ORF的測序及序列分析
    2.4 原核表達載體pET32a(+)-AcPIP1∶2的構(gòu)建
    2.5 原核表達及鑒定
    2.6 AcPIP1∶2的非洲爪蟾卵母細胞表達載體的構(gòu)建
3 結(jié)論



本文編號：3861349