種間雜交和異源多倍體化給遠緣植物物種之間的基因交換、遺傳性狀變異以及新種質(zhì)資源的創(chuàng)建提供了一個重要途徑。蕓薹屬三個二倍體基本種(甘藍、白菜、黑芥)之間通過兩兩雜交的方式,獲得了甘藍型油菜、芥菜型油菜、埃塞俄比亞芥菜等一系列豐富種質(zhì)資源,極大豐富了蔬菜、油料等經(jīng)濟作物資源庫。目前,人工合成的蕓薹屬異源多倍體成為研究蕓薹屬之間遺傳重組和穩(wěn)定性的優(yōu)秀模式材料,但對三基因組單倍型材料的研究報道較少。因此,在本研究中,使用異源四倍體種埃塞俄比亞芥菜(BBCC)作為母本,同源二倍體種白菜(AA)作為父本,通過人工雜交,成功創(chuàng)制出蕓薹屬異源三倍體新雜交種ABC。對異源三倍體及其親本的表型特征進行觀察統(tǒng)計;對比異源三倍體雜交種及親本的減數(shù)分裂過程;通過免疫熒光染色技術,研究其減數(shù)分裂過程中調(diào)控聯(lián)會復合體形成的特異蛋白ZYP1的表達情況;通過免疫熒光定位技術研究其減數(shù)分裂過程中細胞骨架的動態(tài)定位情況;利用基因組原位雜交研究異源三倍體雜交種的染色體分別在基因組內(nèi)和組間的配對現(xiàn)象;利用石蠟切片技術研究雜交種與親本的花藥發(fā)育情況;利用熒光定量PCR對7個調(diào)控減數(shù)分裂過程的基因,以及2個調(diào)控花藥發(fā)育的重要基因,...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 蕓薹屬植物遠緣雜交研究進展
        1.1.1 蕓薹屬遠緣雜交不親和性的機理
        1.1.2 克服遠緣雜交不親和性的方法
        1.1.3 遠緣雜交中常見的染色體特殊行為
    1.2 蕓薹屬A,B,C三基因組研究進展
    1.3 人工合成多倍體雜交材料細胞學研究進展
        1.3.1 流式倍性細胞鑒定術研究進展
        1.3.2 免疫熒光研究進展
        1.3.3 原位雜交研究進展
    1.4 減數(shù)分裂研究進展
        1.4.1 減數(shù)分裂過程及意義
        1.4.2 減數(shù)分裂調(diào)控機制研究進展
        1.4.3 聯(lián)會復合體的研究進展
    1.5 異源多倍體與同源多倍體減數(shù)分裂調(diào)控的研究進展
    1.6 植物花藥與花粉發(fā)育的研究進展
    1.7 研究目的及意義
2 異源三倍體雜種的材料鑒定與性狀分析
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 雜交種獲得與植株鑒定
        2.2.2 形態(tài)學觀察
        2.2.3 氣孔觀察
        2.2.4 花粉育性鑒定
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 異源三倍體雜種的形態(tài)學特征
        2.3.2 花粉育性鑒定
        2.3.3 異源三倍體氣孔觀察
    2.4 討論
3.異源三倍體雜種減數(shù)分裂過程觀察
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 鑒定減數(shù)分裂時期的取材范圍
        3.2.2 減數(shù)分裂時期分裂相細胞的染色體制片
        3.2.3 聯(lián)會復合體調(diào)控蛋白ZYP1抗體在異源三倍體雜交種中的免疫定位
        3.2.4 異源三倍體雜種的基因組原位熒光雜交
        3.2.5 細胞骨架β-tubulin微管蛋白在異源三倍體雜交種中的免疫定位
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 減數(shù)分裂時期取材范圍
        3.3.2 減數(shù)分裂時期細胞學鑒定
        3.3.3 聯(lián)會復合體調(diào)控蛋白ZYP1抗體在異源三倍體雜交種中的免疫定位
        3.3.4 異源三倍體雜種的基因組原位熒光雜交
        3.3.5 細胞骨架β-tubulin微管蛋白在異源三倍體雜交種中的免疫定位
    3.4 討論
4.異源三倍體花藥發(fā)育過程觀察
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 成熟花藥與柱頭的掃描電鏡觀察
        4.2.2 成熟花粉粒的掃描電鏡觀察
        4.2.3 花藥不同發(fā)育時期的石蠟切片
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 成熟花藥與柱頭的掃描電鏡觀察結(jié)果
        4.3.2 成熟花粉粒的掃描電鏡觀察
        4.3.3 花藥不同發(fā)育時期的石蠟切片觀察結(jié)果
    4.4 討論
5 異源三倍體中調(diào)控減數(shù)分裂與花藥發(fā)育的關鍵基因表達量分析
    5.1 實驗材料
    5.2 實驗方法
        5.2.1 減數(shù)分裂調(diào)控基因、花藥發(fā)育調(diào)控基因以及內(nèi)參基因的選取和引物設計
        5.2.2 提取檢測RNA
        5.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        5.2.4 實時定量熒光PCR測定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 總RNA的質(zhì)量與濃度
        5.3.2 異源三倍體中涉及減數(shù)分裂及花藥發(fā)育幾個關鍵基因表達量變化分析
    5.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻
附錄一：本實驗所用主要儀器設備
個人簡介
致謝



本文編號：3846162