黑酵母(Black Yeast)是一類在細(xì)胞壁內(nèi)外產(chǎn)黑色素的酵母狀真菌,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最耐鹽真核生物之一。黑酵母具有典型的細(xì)胞多形性,產(chǎn)黑色素、胞外多糖等特征,但這些因素是否與其高耐鹽的特性相關(guān),目前還不清楚,同時(shí)具有上述特性的一種黑酵母出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)為研究這個(gè)科學(xué)問(wèn)題提供了重要模型。本試驗(yàn)以一株分離于草莓果實(shí)的黑酵母:出芽短梗霉NG作為材料,檢測(cè)在不同鹽脅迫條件下的菌體生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞分化表型、抗?jié)B透應(yīng)激積累物質(zhì)等特征,并通過(guò)轉(zhuǎn)錄組學(xué)探究其耐鹽性的分子生物學(xué)機(jī)制,結(jié)論如下:(1)出芽短梗霉通過(guò)細(xì)胞分化響應(yīng)NaCl脅迫。鹽脅迫條件下細(xì)胞分化為膨大細(xì)胞抵抗NaCl脅迫并通過(guò)多端出芽方式繁殖,在低鹽濃度(<9%NaCl)時(shí),細(xì)胞可以分化為菌絲體逃離不利環(huán)境。在高鹽濃度時(shí),細(xì)胞向耐鹽性更強(qiáng)的膨大細(xì)胞、有橫膈膜的膨大細(xì)胞和分生組織結(jié)構(gòu)分化。(2)出芽短梗霉能通過(guò)積累甘油來(lái)抵抗高滲透脅迫,甘油積累量與NaCl濃度呈正相關(guān)。胞內(nèi)積累甘油量隨培養(yǎng)時(shí)間有波動(dòng)性,波動(dòng)程度跟NaCl濃度呈線性相關(guān),細(xì)胞通過(guò)調(diào)節(jié)甘油積累消耗平衡細(xì)胞生長(zhǎng)與鹽脅迫適應(yīng)。出芽短...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 酵母鹽脅迫信號(hào)傳導(dǎo)途徑
        1.1.1 HOG-MAPK信號(hào)途徑
        1.1.2 CaN信號(hào)途徑
        1.1.3 PKA信號(hào)途徑
    1.2 酵母鹽脅迫的分子應(yīng)答機(jī)制
        1.2.1 Na+平衡機(jī)制
        1.2.2 滲透平衡機(jī)制
    1.3 相容性溶質(zhì)
        1.3.1 糖類及糖苷類
        1.3.2 醇類
        1.3.3 甜菜堿類
        1.3.4 氨基酸類
    1.4 黑酵母耐鹽研究進(jìn)展
        1.4.1 黑酵母
        1.4.2 黑酵母耐鹽研究進(jìn)展
    1.5 出芽短梗霉的研究進(jìn)展
        1.5.1 出芽短梗霉概述
        1.5.2 出芽短梗霉的生理代謝產(chǎn)物
        1.5.3 出芽短梗霉的細(xì)胞多形性
    1.6 出芽短梗霉耐鹽機(jī)制研究意義
    1.7 技術(shù)路線
第二章 鹽脅迫下出芽短梗霉NG的表型特性
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 試驗(yàn)所用菌種、試劑
        2.2.2 培養(yǎng)基配方
        2.2.3 主要儀器與廠家
    2.3 方法
        2.3.1 菌種活化和種子培養(yǎng)
        2.3.2 鹽脅迫下菌體生長(zhǎng)情況
        2.3.3 鹽脅迫下菌落形態(tài)特征
        2.3.4 鹽脅迫下細(xì)胞形態(tài)特征
        2.3.5 鹽脅迫下細(xì)胞微觀形態(tài)特征
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG生長(zhǎng)情況分析
        2.4.2 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG菌落生長(zhǎng)特征
        2.4.3 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG細(xì)胞形態(tài)特征
        2.4.4 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG細(xì)胞超微形態(tài)
    2.5 小結(jié)
第三章 出芽短梗霉NG抗?jié)B透應(yīng)激機(jī)制
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 試驗(yàn)所用菌種、試劑
        3.2.2 培養(yǎng)基和滅菌條件
        3.2.3 主要儀器與廠家
    3.3 方法
        3.3.1 菌體培養(yǎng)與收集
        3.3.2 菌體干重測(cè)定
        3.3.3 甘油HPLC檢測(cè)方法
        3.3.4 海藻糖HPLC檢測(cè)方法
        3.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 菌體生物量
        3.4.2 甘油標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.4.3 胞內(nèi)甘油含量分析
        3.4.4 胞內(nèi)甘油動(dòng)態(tài)變化含量
        3.4.5 胞內(nèi)海藻糖HPLC檢測(cè)分析
    3.5 小結(jié)
第四章 鹽脅迫條件下出芽短梗霉NG的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 試驗(yàn)所用菌種、試劑
        4.2.2 培養(yǎng)基和滅菌條件
        4.2.3 主要儀器與廠家
    4.3 方法
        4.3.1 菌種活化和種子培養(yǎng)
        4.3.2 菌體的培養(yǎng)與收集
        4.3.3 總RNA提取和核酸質(zhì)量檢測(cè)
        4.3.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建
        4.3.5 轉(zhuǎn)錄本組裝
        4.3.6 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析流程
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        4.4.2 轉(zhuǎn)錄本組裝
        4.4.3 基因功能注釋
        4.4.4 差異基因分析
        4.4.5 耐Na Cl脅迫相關(guān)差異基因分析
        4.4.6 甘油合成相關(guān)差異表達(dá)基因
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章



本文編號(hào)：3820969