發(fā)布時間：2023-05-19 18:09

　　細胞是相對獨立的生命基本單位,同一類型的細胞代謝途徑基本相同。一般而言,研究細胞生長的基本規(guī)律,主要途徑為觀察整個細胞群的生長狀態(tài)。由于微環(huán)境的差異,往往存在“細胞異質性”現(xiàn)象。對于單細胞分析技術而言,它的優(yōu)勢在于能對細胞的生理狀態(tài)獲得更加全面的信息。以電感耦合等離子體質譜儀(ICP-MS)為主要手段的單細胞分析方法在單個細胞的元素檢測上提供了解決途徑,事實上,ICP-MS單細胞分析已在藥物的檢測、毒理檢測等方面體現(xiàn)了它的能力。本文利用ICP-MS分析了單個C.testosteroni S44細胞中的硒元素含量與分布狀態(tài)。其中菌株S44細胞可以還原亞硒酸鈉(Se(Ⅳ)),并在胞內生成硒納米粒子(BioSeNPs),通過添加亞硒酸鈉對菌株S44的培養(yǎng)與優(yōu)化,利用得到的含納米粒子的細胞進行了ICP-MS的單細胞分析實驗。主要研究內容與結果如下:(1)胞內硒納米顆粒的生物制備。通過對菌株S44培養(yǎng)條件的探索,我們發(fā)現(xiàn)其在28℃、搖床轉速150r/min、接種比例為1%、培養(yǎng)液體積為100mL、Se(Ⅳ)濃度為0.2mmol/L的條件下得到了球形的硒納米顆粒,尺寸分布在50-300nm,Se(...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 緒論
    1.1 單細胞分析的意義
    1.2 基于ICP-MS的單細胞元素分析
    1.3 ICP-MS元素分析的研究熱點
        1.3.1 時間分辨ICP-MS單細胞分析原理的探索
        1.3.2 ICP-MS單細胞分析中進樣技術的革新
        1.3.3 元素標記策略下的ICP-MS定量分析
        1.3.4 基于ICP-MS聯(lián)用技術的應用
    1.4 微生物還原亞硒酸鈉合成硒納米的研究
        1.4.1 硒與人體健康密切相關
        1.4.2 SeNPs的制備方法
        1.4.3 代謝硒化合物的微生物資源
        1.4.4 微生物對硒的轉化機制簡介
    1.5 課題研究意義與內容
        1.5.1 課題的研究意義簡述
        1.5.2 課題的主要研究內容
第二章 硒納米顆粒的生物制備
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗菌株
        2.2.2 儀器及試劑
        2.2.3 培養(yǎng)基的選擇
    2.3 實驗方法
        2.3.1 菌株S44還原Se(Ⅳ)合成BioSeNPs
            2.3.1.1 菌株S44的活化培養(yǎng)
            2.3.1.2 Se(Ⅳ)轉化為BioSeNPs轉化率的測定
            2.3.1.3 生物硒納米顆粒BioSeNPs的提取
        2.3.2 菌株S44生長曲線的繪制
        2.3.3 菌株S44還原Se(Ⅳ)的單因素實驗設計
            2.3.3.1 溶液初始pH對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.2 搖床溫度對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.3 菌株S44接種比對還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.4 搖床轉速對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.5 錐形瓶裝液量對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.6 Se(Ⅳ)濃度對菌株S44還原亞硒酸鈉的影響
    2.4 實驗結果與討論
        2.4.1 菌株S44還原Se(Ⅳ)溶液顏色的變化
        2.4.2 菌株S44的生長曲線
        2.4.3 不同初始pH對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.4 不同溫度對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.5 不同接種比例對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.6 不同搖床轉速對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.7 不同裝液量對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.8 Se(Ⅳ)濃度對菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.9 掃描電鏡觀察
        2.4.10 透射電鏡觀察
        2.4.11 EDX能譜分析
        2.4.12 紫外光譜分析
        2.4.13 紅外光譜分析
        2.4.14 還原產物BioSeNPs的 Zeta電位分析
    2.5 本章小結
第三章 硒納米顆粒的優(yōu)化制備探索
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗試劑
        3.2.2 添加劑的溶液制備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 BSA溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
        3.3.2 CTS溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
        3.3.3 PVP溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
    3.4 實驗結果與討論
        3.4.1 外源添加物對菌株S44還原Se(Ⅳ)溶液顏色的變化
        3.4.2 BSA溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.3 CTS溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.4 PVP溶液與LB培養(yǎng)基體積比對Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.5 不同添加劑下Se(Ⅳ)轉化率隨時間的變化曲線
        3.4.6 不同添加劑培養(yǎng)下產物的透射電鏡觀察
        3.4.7 不同添加劑培養(yǎng)下產物的紅外光譜分析
        3.4.8 不同添加劑培養(yǎng)下產物的Zeta電位分析
    3.5 本章小結
第四章 硒納米的ICP-MS檢測分析
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗菌株
        4.2.2 儀器及試劑
        4.2.3 實驗方法
            4.2.3.1 菌株S44胞內具有BioSeNPs材料的培養(yǎng)
            4.2.3.2 菌株S44胞內具有BioSeNPs材料的分散
            4.2.3.3 ICP-MS分析菌株S44胞內BioSeNPs
            4.2.3.4 ICP-MS單細胞數(shù)據(jù)分析方法
    4.3 實驗結果與討論
        4.3.1 單細胞事件的分辨
        4.3.2 不同樣品引入ICP-MS效率的比較
        4.3.3 合適菌株S44細胞的選取
        4.3.4 菌株S44表面EPS的去除
        4.3.5 菌株S44進樣密度的選擇
        4.3.6 ICP-MS重要參數(shù)Dwell Time(分辨時間)的探究
            4.3.6.1 Dwell Time對ICP-MS信號峰型的影響
            4.3.6.2 Dwell Time對ICP-MS信號強度的影響
            4.3.6.3 Dwell Time對ICP-MS信號數(shù)量的影響
        4.3.7 胞內硒納米顆粒的ICP-MS定性檢測分析
            4.3.7.1 不同濃度Se(Ⅳ)培養(yǎng)下ICP-MS單細胞事件數(shù)的變化
            4.3.7.2 ICP-MS應用于胞內硒納米顆粒的定性檢測分析
            4.3.7.3 菌株S44不同培養(yǎng)時間下的ICP-MS實時檢測
    4.4 本章小結
第五章 總結與展望
    5.1 全文總結
    5.2 研究展望
參考文獻
致謝



本文編號：3819839