利用Red同源重組技術(shù)敲除大腸桿菌BL21(DE₃)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE₃)ΔptsG。構(gòu)建重組質(zhì)粒,得到表達(dá)大腸桿菌絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE₃)/pET-glyA、BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA,及共表達(dá)SHMT和透明顫菌血紅蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)工程菌株BL21(DE₃)ΔptsG/pET-SV。在LB培養(yǎng)基中,BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA菌株與BL21(DE₃)/pET-glyA菌株生長(zhǎng)情況沒有明顯差異,BL21(DE₃)ΔptsG/pET-SV菌株穩(wěn)定期的OD_{600 nm}值比BL21(DE₃)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.3%,在LBG培養(yǎng)基中,穩(wěn)定...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑、試劑盒與引物
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 儀器與設(shè)備
    1.3 方法
        1.3.1 ptsG基因敲除菌株的構(gòu)建
        1.3.2 表達(dá)載體及工程菌株的構(gòu)建
        1.3.3 菌株生長(zhǎng)測(cè)定
        1.3.4 工程菌誘導(dǎo)表達(dá)SHMT
        1.3.5 SHMT表達(dá)水平及酶活力測(cè)定
    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 ptsG基因敲除
    2.2 重組載體與工程菌株的構(gòu)建
    2.3 重組菌株生長(zhǎng)曲線
    2.4 工程菌株的誘導(dǎo)表達(dá)及酶活力分析
3 討論



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