目的研究外源基因拷貝數(shù)、生產工藝、細胞多樣性對宿主細胞蛋白表達的影響。方法構建空載體CHO K1細胞株,檢測其外源基因拷貝數(shù),根據(jù)拷貝數(shù)的低、中、高對細胞進行分類。使用不同的生產工藝測試低拷貝、中等拷貝和高拷貝的細胞群,觀察其宿主細胞蛋白表達之間的差異。最后將三個拷貝數(shù)水平的細胞群進行混合,再生產,觀察其混合表達的宿主細胞蛋白與單獨生產時表達宿主細胞蛋白的差異。結果研究結果顯示,不同拷貝數(shù)背景的細胞群之間表達宿主細胞蛋白相差6%～13%。相同的細胞進行不同的工藝生產時,也因為基礎培養(yǎng)基和補料的不同而使宿主細胞蛋白的種類不同。細胞多樣性增加并不能引起宿主細胞蛋白表達的種類增多。結論宿主細胞蛋白的表達與外源基因拷貝數(shù)、生產工藝以及細胞群的多樣性有關。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 材料來源
        1.1.2 試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 表達外源基因的CHO K1空載體細胞株的建立
        1.2.2 外源基因相對拷貝數(shù)的檢測
        1.2.3 不同生產工藝針對不同拷貝數(shù)背景的細胞群進行宿主細胞蛋白的生產
        1.2.4 不同多樣性細胞群進行宿主細胞蛋白的生產
        1.2.5 宿主細胞蛋白種類的分析與對比
2 結果
    2.1 表達空載體CHO K1細胞群的篩選
    2.2 不同拷貝數(shù)背景的細胞群建立
    2.3 不同生產工藝的批次補料實驗
    2.4 細胞多樣性
3 討論



本文編號：3771985