結直腸癌是全球第三大常見惡性腫瘤,近年來其發(fā)病率和死亡率在發(fā)展中國家不斷增加。目前腫瘤治療藥物主要通過誘導細胞凋亡抑制腫瘤生長,大多數癌細胞由于細胞凋亡機制失調而具有耐藥性。Necroptosis是一種Caspase非依賴性細胞死亡方式,主要通過RIPK1和RIPK3嚴格調控,并且由MLKL執(zhí)行完成。細胞受到內源性和外源性因素影響時,可誘導細胞發(fā)生DNA損傷（DSBs）,而DNA的DSBs是最嚴重的一種損傷。細胞發(fā)生DSBs后會激活細胞周期檢查點,協調修復DNA損傷,調節(jié)基因表達。DSBs損傷分子標記物γH2AX在Necroptosis過程中會招募線粒體中的AIF易位形成DNA降解復合物,DNA DSBs的產生對染色質的溶解具有重要作用。Necroptosis為癌癥治療提供了新策略。本實驗室已從黍糠中提取出一種含血紅素輔基的陽離子過氧化物酶（proso millet peroxidase,PmPOD）,并且發(fā)現PmPOD可以誘導HCT116和HT29細胞發(fā)生RIPK1和RIPK3依賴性Necroptosis。雖然其確切的分子機制仍不清楚,但最近研究發(fā)現PmPOD可通過體外水解機制切割D... 

【文章頁數】：62 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 結直腸癌簡介
    1.2 壞死性凋亡
    1.3 DNA損傷應答
        1.3.1 ATM-CHK2信號通路
        1.3.2 ATR-CHK1信號通路
    1.4 黍子過氧化物酶
    1.5 研究目的及意義
第二章 PmPOD通過胞飲作用進入細胞
    2.1 引言
    2.2 實驗材料、試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 細胞活力檢測
        2.3.3 細胞形態(tài)學觀察
        2.3.4 流式細胞術檢測
        2.3.5 免疫熒光染色
    2.4 實驗結果
        2.4.1 PmPOD對結直腸癌細胞形態(tài)的影響
        2.4.2 PmPOD對結直腸癌細胞增殖的影響
        2.4.3 PmPOD誘導HCT116和HT29細胞Necroptosis
        2.4.4 PmPOD在結直腸癌細胞核中定位
        2.4.5 細胞膜膽固醇降低抑制PmPOD誘導細胞增殖
        2.4.6 細胞膜膽固醇降低對PmPOD定位的影響
    2.5 討論
第三章 PmPOD誘導細胞DNA損傷
    3.1 引言
    3.2 實驗材料、試劑與儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞周期檢測
        3.3.2 單細胞凝膠電泳實驗
        3.3.3 細胞核形態(tài)觀察
        3.3.4 免疫熒光染色
        3.3.5 Western Blot檢測
    3.4 實驗結果
        3.4.1 PmPOD誘導HCT116和HT29細胞周期停滯于S期
        3.4.2 PmPOD對細胞核形態(tài)的影響
        3.4.3 PmPOD誘導結直腸癌細胞DSBs
        3.4.4 PmPOD誘導DNA損傷發(fā)生在Necroprosis上游
        3.4.5 PmPOD誘導結直腸癌細胞形成γH2AX
        3.4.6 PmPOD誘導結直腸癌細胞γH2AX表達量上調
        3.4.7 PmPOD誘導結直腸癌細胞形成p-ATM病灶
        3.4.8 PmPOD誘導結腸癌細胞Lamin B1解聚
    3.5 討論
第四章 PmPOD誘導的DNA損傷和Necroptosis與p53表達有關
    4.1 引言
    4.2 實驗材料、試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 單細胞凝膠電泳實驗
        4.3.2 MTT檢測
        4.3.3 siRNA p53干擾
        4.3.4 pCMV3-TP53-myc質粒轉染
        4.3.5 Western Blot
    4.4 實驗結果
        4.4.1 siRNA p53對細胞活力的影響
        4.4.2.siRNA p53對PmPOD誘導細胞DSBs的影響
        4.4.3.p53異位表達對細胞活力的影響
        4.4.4.p53異位表達對PmPOD誘導DSBs的影響
    4.5 討論
小結與展望
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡況及聯系方式



本文編號：3680181