水稻（Oryza sativa L.）是人類最主要的糧食作物之一,WRKY轉(zhuǎn)錄因子是水稻中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一。水稻中有近百個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員,每個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子都有其特定的編號(hào)和功能。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)OsWRKY68蛋白質(zhì)在水稻接種白葉枯病菌后誘導(dǎo)表達(dá),在葉片中組成型表達(dá)。溫度、干旱和鹽等非生物逆境嚴(yán)重危害水稻的生長和產(chǎn)量,研究水稻W(wǎng)RKY轉(zhuǎn)錄因子的功能對了解水稻生長發(fā)育、抗病抗逆機(jī)理等具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本研究利用OsWRKY68蛋白質(zhì)特異抗體,通過免疫印跡技術(shù)調(diào)查了OsWRKY68蛋白質(zhì)在水稻正常生長發(fā)育、非生物脅迫和激素處理?xiàng)l件下的表達(dá)特征,發(fā)現(xiàn)OsWRKY68蛋白質(zhì)在水稻正常生長發(fā)育過程中基本呈組成型表達(dá),分子量約為32 kD,和預(yù)測理論值大小相符。在鹽脅迫和恒暗處理后OsWRKY68蛋白質(zhì)的表達(dá)豐度隨時(shí)間延長持續(xù)下降。恒光、茉莉酸甲酯和乙烯利處理后,誘導(dǎo)了分子量較大的OsWRKY68⁺的表達(dá),且表達(dá)豐度隨時(shí)間延長逐漸增加。對OsWRKY68 RNAi轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行PCR和WB鑒定,觀察轉(zhuǎn)基因水稻的表型并分析其農(nóng)藝性狀。通過鑒定,獲... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

OsWRKY68蛋白質(zhì)在水稻離體葉片恒暗、恒光和H2O2（10mmol/L）處理下的表達(dá)特征

RKY68 蛋白質(zhì)在水稻苗期 NaCl（200 mmol/L）和 PEG6000（20%ession profiling of rice OsWRKY68 protein at seedling stage under 20PEG6000 treatment，經(jīng) 4℃、44℃和 48℃脅迫處理后，隨著時(shí)間的延長，沒有明顯改變。水淹脅迫處理后（圖 4b），OsWRKY表明，OsWRKY68 蛋白質(zhì)在鹽脅迫和恒暗脅迫應(yīng)答過OsWRKY68+）在恒光脅迫中發(fā)揮作用。

ABA：脫落酸；ET：乙烯利；MeJA：茉莉酸甲酯；SA：水楊酸ABA: Abscisic acid; ET: Ethephon; MeJA: Methyl jasmonate; SA: Salicy圖 5 水稻 OsWRKY68 蛋白質(zhì)受激素處理后的表達(dá)特征Fig. 5 The expression profilling of OsWRKY68 protein were treated with hsWRKY68 RNAi 轉(zhuǎn)基因株系的鑒定介導(dǎo)法將 OsWRKY68 基因 RNAi 質(zhì)粒導(dǎo)入水稻受體 TP309，號(hào)為 G309-G319 和 G325-G337。對這 24 個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行株系 G310、G316、G317、G326、G330 和 G337，將 PCR中，并通過 PCR 和 WB 技術(shù)對后代繼續(xù)進(jìn)行鑒定。6 個(gè)陽性株系的 T3代各 5 株轉(zhuǎn)基因水稻分別進(jìn)行檢測，PCR317、Y326 和 Y337 中均出現(xiàn)了大小為 1000 bp 的條帶，而在6a），表明 OsWRKY68 基因 RNAi 質(zhì)粒導(dǎo)入成功，并且穩(wěn)定遺轉(zhuǎn)基因株系中 OsWRKY68 蛋白質(zhì)的表達(dá)豐度均比 TP309 低性的 OsWRKY68 蛋白質(zhì)下調(diào)的轉(zhuǎn)基因株系即 Y316、Y317、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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