發(fā)布時(shí)間：2022-01-11 14:43

　　遺傳密碼子拓展系統(tǒng)目前主要應(yīng)用于生命系統(tǒng)蛋白質(zhì)的標(biāo)記和修飾,能夠與反向遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合,通過(guò)將終止密碼子UAG變?yōu)橛辛x密碼子,將非天然氨基酸（unnatural amino acids,UAAs）靶向引入到蛋白質(zhì)的特定位點(diǎn),實(shí)現(xiàn)非天然氨基酸對(duì)病毒表型的靶向控制。目前,遺傳密碼子拓展系統(tǒng)已成功應(yīng)用于丁型肝炎病毒（HDV）、腺病毒、人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）和流感病毒等,實(shí)現(xiàn)了非天然氨基酸對(duì)病毒顆粒的表面修飾以及對(duì)病毒復(fù)制和感染的調(diào)控。通過(guò)將遺傳密碼子拓展系統(tǒng)與反向遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合并擴(kuò)展應(yīng)用于重要的人類病原體,可以實(shí)現(xiàn)非天然氨基酸對(duì)病毒復(fù)制和感染的系統(tǒng)調(diào)控,將為其遺傳改造、致病機(jī)制研究和疫苗設(shè)計(jì)提供重要的思路。寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）屬于黃病毒科黃病毒屬,為單股正鏈RNA病毒,主要依靠蚊蟲(chóng)傳播,自暴發(fā)流行以來(lái)引起了全世界的廣泛關(guān)注。寨卡病毒與黃熱病毒（yellow fever virus,YFV）、西尼羅病毒（West Nile virus,WNV）、登革病毒（dengue virus,DENV）、乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis viru... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

特異性的引入非天然氨基酸

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文13非洲和亞洲狹窄的赤道地區(qū)。1966年，第一個(gè)在非洲以外分離的寨卡病毒株是從馬來(lái)西亞的埃及伊蚊中分離獲得[23]。2007年以前，寨卡病毒僅在亞洲和非洲有散發(fā)的病例報(bào)道，且沒(méi)有引起可察覺(jué)的暴發(fā)和嚴(yán)重的人類疾病[24]。此后，在西太平洋地區(qū)的密克羅尼西亞雅浦島，首次暴發(fā)了大規(guī)模的寨卡疫情，寨卡病毒感染了全島四分之三的居民[25]。接著寨卡病毒又在東南亞的一些國(guó)家出現(xiàn)了散發(fā)病例。2013-2014年，寨卡病毒在法屬波利尼西亞和南太平洋等其他地區(qū)發(fā)生了大流行，并于2014年擴(kuò)散至美洲，造成超過(guò)70萬(wàn)例本地感染[26,27]。2015年寨卡病毒在巴西大暴發(fā)，并迅速擴(kuò)散至其他國(guó)家，最后波及全球80多個(gè)國(guó)家和地區(qū)[28]（圖2）。更重要的是，隨著寨卡病毒的大范圍流行，發(fā)現(xiàn)其感染可導(dǎo)致格林巴利綜合征（Guillain-Barrésyndrome，GBS）、新生兒小頭癥等嚴(yán)重疾病，引起了全世界的廣泛關(guān)注[29-31]。2016年2月1日，WHO宣布可能與寨卡病毒感染相關(guān)的小頭畸形和其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病聚集性病例構(gòu)成國(guó)際關(guān)注突發(fā)公共衛(wèi)生事件[32]。目前，針對(duì)寨卡病毒感染尚無(wú)獲批的臨床疫苗，且缺乏有效的治療手段[33]。因此,研制寨卡疫苗的需求十分迫切。圖22007-2016年寨卡病毒的暴發(fā)[28]Figure2Zikavirusoutbreaksfrom2007-2016[28]

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文172.2.3.1引物設(shè)計(jì)以寨卡病毒分離株FSS13025的全長(zhǎng)感染性克隆基因組序列為模板，根據(jù)NEB的Q5點(diǎn)突變?cè)噭┖校≦5Site-DirectedMutagenesisKit）要求以及突變位點(diǎn)的位置，在NEB的網(wǎng)站上使用NEBaseChangerTM在線設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)相應(yīng)的突變引物（Table1）。突變質(zhì)粒構(gòu)建示意圖如圖1所示。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，序列如Table1所示。圖1-1攜帶琥珀終止密碼子的寨卡病毒全長(zhǎng)感染性克隆的構(gòu)建Figure1-1ConstructionoftheZIKVfμLl-lengthcDNAclonewiththemutationofamberterminalcodon表1-2寨卡病毒琥珀終止密碼子的突變引物Table1-2PrimersusedtomutantamberterminalcodonofZIKV引物名稱引物序列（5’-3’）退火溫度FSS-NS5-22FGATGTCGGCCtagGAGTTCTACTCCTACAAAAAG68℃FSS-NS5-22RTGGTTCAGGCGGGCCTTC71℃FSS-NS5-108FAAAAGGAGGCtagGGTCATGAAGAAC58℃FSS-NS5-108RGTGTATCCTTTCACTTCTTG58℃FSS-NS5-153FGTCATCATCTtagCCTGAAGTGGAAGAAG56℃FSS-NS5-153RTCACCTATATCACACAGC58℃FSS-NS5-246FGCGCATGGACtagCCCAGGAGGC67℃FSS-NS5-246RCCCAAAAGGAGCTGGCTC66℃FSS-NS5-268FGGCTGTGGTAtagTGCGCTGAAGCTCCCAACATGAAGATC70℃


本文編號(hào)：3582960