植物SPL是一類能與SQUAMOSA啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,在植物的生長發(fā)育中發(fā)揮著十分重要的作用。在前期的研究中,我們發(fā)掘到一條非miR156靶向的白樺BpSPL8基因,該基因轉(zhuǎn)化擬南芥后能影響轉(zhuǎn)基因植株葉和根的發(fā)育。本文將在此基礎(chǔ)上進一步研究BpSPL8調(diào)控植物發(fā)育機理。通過克隆獲得了白樺BpSPL8起始密碼子上游2028bp的啟動子片段;構(gòu)建了BpSPL8啟動子驅(qū)動GLU（β-葡萄糖苷酸酶編碼基因）的植物表達載體,并采用浸花法將其轉(zhuǎn)化至擬南芥中;繼而利用GUS染色分析了BpSPL8啟動子的組織表達模式;啟動子元件分析顯示BpSPL8啟動子中含有組織特異表達、光響應(yīng)、激素響應(yīng)及多個脅迫響應(yīng)元件。GUS染色結(jié)果顯示BpSPL8啟動子可在擬南芥的下胚軸、葉片、葉柄、根和花序中啟動GUS基因表達。BpSPL8基因可能在白樺葉片、葉柄、根和花序的發(fā)育中起作用,同時參與白樺對光響應(yīng)、激素響應(yīng)及脅迫響應(yīng)。qRT-PCR分析BpSPL8基因在PEG處理下的野生型白樺的根和葉中均呈現(xiàn)先上調(diào)后下調(diào)的表達趨勢,表明BpSPL8基因可能參與白樺對干旱脅迫的響應(yīng)。因此,我們以過表達BpSPL8擬南芥為材料來... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1BPSPzs啟動子片段

動子段的獲ＮＡ為模板，參照先前已獲得的基因ｃＤＮＡ序列和基因ＰＣＲ擴增獲得約２０００ｂｐ的啟動子片段（圖２－１），目的片段大�。模蹋担埃�?１?２?３??Ｍ—??圖２－１辦ＭＺＳ啟動子片段??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＢｐＳＰＬＳ??動子片段克隆載體構(gòu)建??瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收ＰＣＲ目的片段與ｐＥＡＳＹ？－Ｂｌｕｎｔ?Ｃｌｏｎｉ后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)菌液ＰＣＲ鑒定我們獲得了?５個陽性克�。ㄐ钥寺∷椭凉枮I擎科生物科技有限公司測序。??ＤＬ５０００?１?２?３?４?５?６?＋?—??

根據(jù)測序結(jié)果利用Ｐｒｅｍｉｅｒ?５軟件設(shè)計酶切引物，采用酶切連接的方法構(gòu)建辦??啟動子表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)ＰＣＲ鑒定和再次測序確認后轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，菌液ＰＣＲ??檢測顯示，重組表達載體已成功轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌（圖２－３）。??ＤＬ５０００?１?２?３４?５?６?７?８＋?—??ｍｍＭｍ??圖２－３表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌ＰＣ．Ｒ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ??２．３．５擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化??通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸染花法將辦ＳＰＺＳ啟動子表達載體轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，Ｔｉ種子??經(jīng)卡那霉素抗性篩選，我們獲得了極少的卡那霉素抗性植株（圖２－４）�？强剐孕∶缫�??至土壤中生長待成熟后，提取擬南芥葉片ＤＮＡ，經(jīng)ＰＣＲ鑒定后，收集轉(zhuǎn)基因種子，成??功轉(zhuǎn)化的擬南芥命名為ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ。??ＤＬ５０００?１?２?３?＋?—??圖２－４乃代植株卡那抗性植株??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｔｉ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｐｌａｎｔ?Ｋａｎａ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?ｐｌａｎｔｓ??２．３．６白樺ＳＰＺＳ啟動子轉(zhuǎn)基因擬南芥ＧＵＳ染色??選擇開花期的轉(zhuǎn)ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ擬南芥和野生型進行ＧＵＳ染色，結(jié)果如圖２－６所??示，轉(zhuǎn)ＰｒｏＳＰＬ８：：ＧＵＳ擬南芥的下胚軸、葉片、葉柄、根和花中（圖２－５ｂ？ｆ）均呈現(xiàn)不??同程度的藍色

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大豆GmbZIP16的抗旱功能驗證及分析[J]. 趙婉瑩,于太飛,楊軍峰,劉沛,陳雋,陳明,周永斌,馬有志,徐兆師,閔東紅.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(15)
[2]干旱脅迫對喀斯特地區(qū)野生茶樹幼苗生理特性及根系生長的影響[J]. 牛素貞,宋勤飛,樊衛(wèi)國,陳正武.  生態(tài)學(xué)報. 2017(21)
[3]胡楊幼苗根系生長與構(gòu)型對土壤水分的響應(yīng)[J]. 呂爽,張現(xiàn)慧,張楠,夏延國,井家林,李景文.  西北植物學(xué)報. 2015(05)

碩士論文
[1]18個白樺SPLs基因的鑒定及BpSPL8基因的功能分析[D]. 劉闖.東北林業(yè)大學(xué) 2017
[2]白樺miR156及其靶基因BpSPL9的功能研究[D]. 申婷婷.東北林業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3563078