人間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)過程中的衰老
發(fā)布時(shí)間：2021-10-30 05:32
MSCs是一類具有跨胚層分化能力的多能成體干細(xì)胞,在基礎(chǔ)研究中多用體外擴(kuò)大培養(yǎng)的方法來獲取更多的干細(xì)胞。但在干細(xì)胞體外擴(kuò)大培養(yǎng)的過程中,存在有干性難維持和細(xì)胞易分化等問題。而細(xì)胞衰老的重要誘因是體內(nèi)外細(xì)胞環(huán)境的變化、細(xì)胞復(fù)制壓力的增加、細(xì)胞間信息交流變化等。所以探究干細(xì)胞在體外擴(kuò)大培養(yǎng)過程中是否有衰老變化,能夠?yàn)楦杉?xì)胞的應(yīng)用研究提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)選用hUC-MSCs為實(shí)驗(yàn)材料,以1:2的傳代比率傳代培養(yǎng)獲得P5,P10,P15,P20,P25和P30 hUC-MSCs。通過細(xì)胞形態(tài)分析發(fā)現(xiàn),hUC-MSCs在傳代培養(yǎng)過程中雖然始終保持成纖維樣的細(xì)胞形態(tài),但隨傳代數(shù)的增加出現(xiàn)體積增大、扁平化和囊泡增多的現(xiàn)象。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs表面標(biāo)志蛋白CD105的表達(dá)隨著傳代數(shù)的增加而顯著降低,但克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各代hUC-MSCs相較于P5 hUC-MSCs的克隆形成無明顯差異。通過β-半乳糖苷酶蛋白表達(dá)量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在P10開始表達(dá)β-半乳糖苷酶,即hUC-MSCs在P10開始出現(xiàn)分子水平上衰老。此外,細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P10,P15,P20,P25和P30 hUC-MSC...
【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
不同傳代數(shù)hUC-MSCs細(xì)胞形態(tài)圖
28圖 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 表面標(biāo)志蛋白 CD105 表達(dá)逐漸變化A 為 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的流式細(xì)胞分析圖，每代 hUC-MSCs 分別用矩形門圈定D105 陽性率，十字門圈定 CD73 和 CD90 雙陽性率。B 為 CD105 的引物驗(yàn)證和 RT-qPCR 結(jié)果。引物所用凝膠為 3%的瓊脂糖凝膠，Marker 為 DL500 Marker，目的條帶為 160bp，M 為 Marker；RT-qP內(nèi)參基因?yàn)?GAPDH，定量計(jì)算方式為 2-△△CT相對(duì)定量，***為 P＜0.001，****為 P＜0.0001。C 為 PP10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的 CD105 Western blot 數(shù)據(jù)結(jié)果。Figure 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs surface marker protein CD105 expression graduallychangedis a flow cytometric analysis of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs. Each generation of hUC-MSses a rectangular gate to limit the positive rate of CD105, and the cross gate limits the CD73 and CD90 dou
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文positive rate.B is the primer verification and RT-qPCR results of CD105. The gel used for primer verification was 3% agarosegel, Marker was DL500 Marker, the target band was 160 bp, M was Marker; RT-qPCR reference gene wasGAPDH, and the quantitative calculation method was 2-△△CTrelative quantification, *** is P < 0.001, and **** isP < 0.0001.C is the CD105 Western blot data of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs.4.1.3 不同代數(shù) hUC-MSCs 的克隆形成能力檢測(cè)此外我們還檢測(cè)了細(xì)胞的克隆形成能力。根據(jù)對(duì)圖 A 中的藍(lán)色細(xì)胞集落的計(jì)數(shù)及三組平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析我們發(fā)現(xiàn)，相較于 P5hUC-MSCs，P10,P15,P20,P25 和 P30hUC-MSCs的克隆形成能力并無差異。
本文編號(hào)：3466149
【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
不同傳代數(shù)hUC-MSCs細(xì)胞形態(tài)圖
28圖 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 表面標(biāo)志蛋白 CD105 表達(dá)逐漸變化A 為 P5, P10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的流式細(xì)胞分析圖，每代 hUC-MSCs 分別用矩形門圈定D105 陽性率，十字門圈定 CD73 和 CD90 雙陽性率。B 為 CD105 的引物驗(yàn)證和 RT-qPCR 結(jié)果。引物所用凝膠為 3%的瓊脂糖凝膠，Marker 為 DL500 Marker，目的條帶為 160bp，M 為 Marker；RT-qP內(nèi)參基因?yàn)?GAPDH，定量計(jì)算方式為 2-△△CT相對(duì)定量，***為 P＜0.001，****為 P＜0.0001。C 為 PP10, P15, P20, P25 和 P30 hUC-MSCs 的 CD105 Western blot 數(shù)據(jù)結(jié)果。Figure 2.2 P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs surface marker protein CD105 expression graduallychangedis a flow cytometric analysis of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs. Each generation of hUC-MSses a rectangular gate to limit the positive rate of CD105, and the cross gate limits the CD73 and CD90 dou
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文positive rate.B is the primer verification and RT-qPCR results of CD105. The gel used for primer verification was 3% agarosegel, Marker was DL500 Marker, the target band was 160 bp, M was Marker; RT-qPCR reference gene wasGAPDH, and the quantitative calculation method was 2-△△CTrelative quantification, *** is P < 0.001, and **** isP < 0.0001.C is the CD105 Western blot data of P5, P10, P15, P20, P25 and P30 hUC-MSCs.4.1.3 不同代數(shù) hUC-MSCs 的克隆形成能力檢測(cè)此外我們還檢測(cè)了細(xì)胞的克隆形成能力。根據(jù)對(duì)圖 A 中的藍(lán)色細(xì)胞集落的計(jì)數(shù)及三組平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析我們發(fā)現(xiàn)，相較于 P5hUC-MSCs，P10,P15,P20,P25 和 P30hUC-MSCs的克隆形成能力并無差異。
本文編號(hào)：3466149
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