基于密碼子通用性及不同物種密碼子使用頻率差異原則,對家蠅乙酰膽堿酯酶的基因序列進行優(yōu)化,旨在提高其在畢赤酵母中的表達量,增強其應用前景。將基因序列中的低頻密碼子更換為畢赤酵母偏好的密碼子,同時調整乙酰膽堿酯酶各區(qū)段GC含量至45%～55%。將優(yōu)化的家蠅乙酰膽堿酯酶連接至表達載體pPIC9K并轉入畢赤酵母GS115中,搖瓶培養(yǎng)。以改進的Ellman法測定重組家蠅乙酰膽堿酯酶（mdAchE）酶學性質,通過有機磷及氨基甲酸酯類農藥抑制試驗分析重組酶mdAchE的生物活性。家蠅乙酰膽堿酯酶密碼子優(yōu)化后在畢赤酵母中實現(xiàn)高效表達,酶活力約8.82 U/mL。抑制試驗顯示,重組酶mdAchE能夠被馬拉硫磷等7種有機磷農藥,克百威等8種氨基甲酸酯類農藥抑制,最低抑制濃度IC₁₅值為1.83×10^-15μg/mL,遠遠低于其它諸如氣相色譜法、生物傳感器等方法測得的最低檢測限(0.01μg/mL,4.14×10^-6μg/mL)。本試驗結果表明,重組乙酰膽堿酯酶mdAchE在有機磷及氨基甲酸酯類農藥殘留的檢測領域具有較大的應用潛力。 

【文章來源】：中國食品學報. 2020,20(12)北大核心EICSCD

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【部分圖文】：

重組乙酰膽堿酯酶md Ach E SDS-PAGE電泳分析

圖1 重組乙酰膽堿酯酶md Ach E SDS-PAGE電泳分析圖2a、圖2b顯示，重組酶md Ach E在20～80℃有活力，在50℃和65℃酶活力相當，其最適反應溫度為60℃。在50,60,70℃3個溫度處理下的前20 min其酶活力均下降得非常明顯，在50℃處理1 h,md Ach E酶活性損失了50%；在60℃處理1 h后，md Ach E相對酶活損失了60%;70℃處理1 h,md Ach E酶活性僅剩38%。

【參考文獻】：
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本文編號：3411836