利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構建人HIF-1α基因敲除細胞株
發(fā)布時間:2021-09-27 19:25
在人源HIF-1α的PAS結構域內設計特異性靶點,構建Cas9-gRNA-HIF-1α敲除質粒,并將其轉染至細胞后經(jīng)嘌呤霉素篩選出21個單克隆細胞株,隨后通過酶切、測序分析及下游基因驗證等方法檢測,最后得到一株特異性敲除HIF-1α的純合子細胞(H20)。所設計的靶點能夠有效地編輯HIF-1α,將為在其他細胞中通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)特異性敲除HIF-1α提供方法借鑒。與此同時,也將為后續(xù)揭示HIF-1在由正常排卵事件演變成卵巢腫瘤過程中的作用機制奠定基礎。
【文章來源】:生物學雜志. 2020,37(06)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】:5 頁
【部分圖文】:
sgRNA選取與質粒的構建
為進一步驗證H20細胞中HIF-1α蛋白的表達情況,用氯化鈷處理野生型(HIF-1α+/+)和敲除細胞(HIF-1α-/-)。免疫印跡結果(圖3)顯示,氯化鈷可明顯誘導野生型細胞中的HIF-1α。然而,與正常細胞相比,H20細胞中HIF-1α幾乎不表達,這說明H20細胞是HIF-1α缺失的穩(wěn)定細胞株。圖3 H20細胞中HIF-1α的蛋白表達情況
H20細胞中HIF-1α的蛋白表達情況
【參考文獻】:
期刊論文
[1]卵巢低氧微環(huán)境調節(jié)哺乳動物排卵的分子機制[J]. 楊芳,張寶云,馮光德,向偉,馬云霞,陳航,儲明星,王憑青. 遺傳. 2016(02)
本文編號:3410492
【文章來源】:生物學雜志. 2020,37(06)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】:5 頁
【部分圖文】:
sgRNA選取與質粒的構建
為進一步驗證H20細胞中HIF-1α蛋白的表達情況,用氯化鈷處理野生型(HIF-1α+/+)和敲除細胞(HIF-1α-/-)。免疫印跡結果(圖3)顯示,氯化鈷可明顯誘導野生型細胞中的HIF-1α。然而,與正常細胞相比,H20細胞中HIF-1α幾乎不表達,這說明H20細胞是HIF-1α缺失的穩(wěn)定細胞株。圖3 H20細胞中HIF-1α的蛋白表達情況
H20細胞中HIF-1α的蛋白表達情況
【參考文獻】:
期刊論文
[1]卵巢低氧微環(huán)境調節(jié)哺乳動物排卵的分子機制[J]. 楊芳,張寶云,馮光德,向偉,馬云霞,陳航,儲明星,王憑青. 遺傳. 2016(02)
本文編號:3410492
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