AP2/ERF類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子,是植物所特有的最大的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子家族,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,扮演著重要的角色。探究花煙草ERF轉(zhuǎn)錄因子的生理功能,為花煙草抵御逆境的分子機(jī)制研究提供借鑒。采用同源克隆的方法進(jìn)行基因克隆。通過(guò)對(duì)花煙草進(jìn)行非生物脅迫,運(yùn)用qPCR的方法進(jìn)行基因表達(dá)模式分析。從花煙草（Nicotiana alata）中克隆了一個(gè)屬于ERF家族的基因NaERF1。該基因的開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)為819 bp,編碼了272個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,該基因編碼的蛋白分子量為30.7 kD,等電點(diǎn)為6.07;具有AP2/ERF類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子家族典型的保守結(jié)構(gòu)域;該基因主要定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),并含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)。同源性分析的結(jié)果顯示,NaERF1基因與茄科植物的ERF同源性較高,并且與普通煙草的ERF親緣關(guān)系最近。NaERF1基因的表達(dá)具有組織表達(dá)特異性,花中表達(dá)量最高,莖中次之,根和葉中表達(dá)量較低。同時(shí),在高鹽、干旱、低溫、ABA、低鉀及H2O2等非生物脅迫下,NaERF1的表達(dá)呈現(xiàn)5種模式。其中,對(duì)低鉀及ABA脅迫的響應(yīng)強(qiáng)烈。NaERF1基因?qū)儆贏P2/ERF類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子,可能廣泛參與了花煙草... 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(01)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

NaERF1基因克隆

利用ExPaSy網(wǎng)站的ProtScale(http：//web.expasy.org/protscale/），選擇Hphob./Kyte&Doolittle算法，對(duì)NaERF1蛋白的親/疏水性進(jìn)行了分析，結(jié)果如圖2所示。NaERF1蛋白序列中第13位氨基酸最高分值為1.144，第266位氨基酸最低分為-2.322�？傮w上看，親水性氨基酸均勻分布在整個(gè)肽鏈中，且平均分值大于疏水性氨基酸，可推測(cè)NaERF1蛋白屬于親水性蛋白。2.2.3 跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

采用ExPASy提供的TMHMM Server(http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）軟件，在線對(duì)NaERF的跨膜區(qū)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果如圖3所示。預(yù)測(cè)結(jié)果表明，NaERF1蛋白沒(méi)有跨膜區(qū)，不屬于跨膜蛋白。2.2.4 亞細(xì)胞定位

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]ERF轉(zhuǎn)錄因子及其在植物防衛(wèi)反應(yīng)中的作用[J]. 黃澤軍,黃榮峰,黃大昉.  植物病理學(xué)報(bào). 2004(03)



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