褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶和超氧化物歧化酶基因的表達與功能分析
發(fā)布時間：2021-07-13 08:23
谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）是多功能的II期解毒酶,其催化親電子底物與谷胱甘肽的連接,在保護生物體免受活性氧物質(zhì)毒性方面起重要作用。本文從褶紋冠蚌Cristaria plicata克隆了一個alpha級GST（CpGST5）cDNA序列。CpGST5 cDNA的全長為1885 bp,開放閱讀框為669 bp,編碼222個氨基酸。蛋白結(jié)構(gòu)分析表明CpGST5的成熟肽包括2個典型結(jié)構(gòu)域,保守域GSTN和保守結(jié)構(gòu)域GSTC,N末端含有GSH結(jié)合位點（G位點）。C末端中含有底物結(jié)合口袋（H位點）的位點。實時定量PCR結(jié)果顯示在各組織中CpMnSOD mRNA組成型表達。CpGST5基因在肝胰腺中表達量最高,外套膜中表達量最低。在微囊藻毒素刺激后,肝胰腺和血淋巴中CpGST5的表達水平顯示出顯著增加的趨勢。重組CpGST5在大腸桿菌中表達為包涵體形式。錳超氧化物歧化酶（Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD）是一種重要的金屬酶,催化ROS在生物體內(nèi)形成無害的分子氧和過氧化氫。本文通過cDNA末端PCR的快速擴增,使...
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA檢測
圖 2.1 總 RNA 檢測Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶紋冠蚌 GST5 基因的克隆根據(jù)構(gòu)建的褶紋冠蚌血細胞轉(zhuǎn)錄組文庫篩選出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分別設(shè)計引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1擴增其中間片段，然后分別設(shè)計特異引物擴增獲得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶紋冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表達與功能分析注:起始密碼子和終止密碼子用下劃線標示，保守域 GST_N 以灰色陰影顯示。 預(yù)測的保守結(jié)構(gòu)域 GST_C 以綠色陰影顯示。N_terminal 中的 GSH 結(jié)合位點（G 位點）加下劃線。C_terminal 中底物結(jié)合口袋（H 位點）的位點用紅色陰影顯示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推導(dǎo)序列的同源性比對將褶紋冠蚌 CpGST5 推導(dǎo)氨基酸序列與 13 種物種的 GST5 的氨基酸序列進行同源多序列比對，結(jié)果顯示，這些物種之間存在相似性。褶紋冠蚌 GST5 氨基酸序列與紫貽貝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，達到 47.17%(圖 2.4)。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素對鴨胚的毒性及半致死劑量研究[J]. 張曉波,李曉青,李璟,程培,袁琪,張易祥. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 當代醫(yī)學. 2011(15)
[3]蕁麻疹患者血清中SOD、MDA的檢測及其意義[J]. 趙旭傳,郜玉玲,尉莉. 中國麻風皮膚病雜志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和應(yīng)用進展[J]. 林慶斌,廖升榮,熊亞紅,樂學義. 化學世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素對水生生物的生態(tài)毒理學研究進展[J]. 胡智泉,李敦海,劉永定,何光源. 自然科學進展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的現(xiàn)狀研究進展[J]. 田春美,鐘秋平. 中國熱帶醫(yī)學. 2005(08)
[7]微囊藻毒素對褶皺臂尾輪蟲的毒性效應(yīng)和種群增長影響[J]. 陳艷,王金秋,王陽,俞順章. 中國環(huán)境科學. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妝品中的應(yīng)用及其發(fā)酵法生產(chǎn)進展[J]. 崔慧斐,張?zhí)烀? 藥物生物技術(shù). 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究進展和應(yīng)用前景[J]. 張博潤,譚華榮. 微生物學通報. 1992(06)
博士論文
[1]三角帆蚌肽聚糖識別蛋白和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的基因克隆和功能分析[D]. 楊子彥.華中科技大學 2013
碩士論文
[1]褶紋冠蚌GST基因克隆與表達分析[D]. 察玉端.南昌大學 2016
[2]松江鱸（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、表達與功能分析[D]. 張秋霞.山東大學 2013
[3]近江牡蠣（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶和金屬硫蛋白基因cDNA克隆及原核表達研究[D]. 張妍.暨南大學 2012
[4]褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽過氧化物酶基因的分子克隆、表達及功能鑒定[D]. 鄧利榮.南昌大學 2011
[5]褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表達及蛋白性質(zhì)研究[D]. 徐歡歡.南昌大學 2011
本文編號：3281719
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA檢測
圖 2.1 總 RNA 檢測Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶紋冠蚌 GST5 基因的克隆根據(jù)構(gòu)建的褶紋冠蚌血細胞轉(zhuǎn)錄組文庫篩選出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分別設(shè)計引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1擴增其中間片段，然后分別設(shè)計特異引物擴增獲得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶紋冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表達與功能分析注:起始密碼子和終止密碼子用下劃線標示，保守域 GST_N 以灰色陰影顯示。 預(yù)測的保守結(jié)構(gòu)域 GST_C 以綠色陰影顯示。N_terminal 中的 GSH 結(jié)合位點（G 位點）加下劃線。C_terminal 中底物結(jié)合口袋（H 位點）的位點用紅色陰影顯示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推導(dǎo)序列的同源性比對將褶紋冠蚌 CpGST5 推導(dǎo)氨基酸序列與 13 種物種的 GST5 的氨基酸序列進行同源多序列比對，結(jié)果顯示，這些物種之間存在相似性。褶紋冠蚌 GST5 氨基酸序列與紫貽貝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，達到 47.17%(圖 2.4)。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素對鴨胚的毒性及半致死劑量研究[J]. 張曉波,李曉青,李璟,程培,袁琪,張易祥. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 當代醫(yī)學. 2011(15)
[3]蕁麻疹患者血清中SOD、MDA的檢測及其意義[J]. 趙旭傳,郜玉玲,尉莉. 中國麻風皮膚病雜志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和應(yīng)用進展[J]. 林慶斌,廖升榮,熊亞紅,樂學義. 化學世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素對水生生物的生態(tài)毒理學研究進展[J]. 胡智泉,李敦海,劉永定,何光源. 自然科學進展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的現(xiàn)狀研究進展[J]. 田春美,鐘秋平. 中國熱帶醫(yī)學. 2005(08)
[7]微囊藻毒素對褶皺臂尾輪蟲的毒性效應(yīng)和種群增長影響[J]. 陳艷,王金秋,王陽,俞順章. 中國環(huán)境科學. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妝品中的應(yīng)用及其發(fā)酵法生產(chǎn)進展[J]. 崔慧斐,張?zhí)烀? 藥物生物技術(shù). 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究進展和應(yīng)用前景[J]. 張博潤,譚華榮. 微生物學通報. 1992(06)
博士論文
[1]三角帆蚌肽聚糖識別蛋白和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的基因克隆和功能分析[D]. 楊子彥.華中科技大學 2013
碩士論文
[1]褶紋冠蚌GST基因克隆與表達分析[D]. 察玉端.南昌大學 2016
[2]松江鱸（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、表達與功能分析[D]. 張秋霞.山東大學 2013
[3]近江牡蠣（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶和金屬硫蛋白基因cDNA克隆及原核表達研究[D]. 張妍.暨南大學 2012
[4]褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽過氧化物酶基因的分子克隆、表達及功能鑒定[D]. 鄧利榮.南昌大學 2011
[5]褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表達及蛋白性質(zhì)研究[D]. 徐歡歡.南昌大學 2011
本文編號：3281719
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