發(fā)布時(shí)間：2021-06-26 08:02

　　通過控制電穿孔時(shí)的電壓、電脈沖時(shí)長、電脈沖次數(shù)、質(zhì)粒濃度和細(xì)胞狀態(tài)等轉(zhuǎn)染條件,將pcDNA3.1（+）-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞,于倒置熒光顯微鏡下觀察EGFP表達(dá)情況以檢測轉(zhuǎn)染效率,探討不同電穿孔條件對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的影響,確定MCF-7細(xì)胞的最佳電轉(zhuǎn)染條件。結(jié)果表明:人乳腺癌細(xì)胞MCF-7在電壓150 V、質(zhì)粒濃度1μg/μL左右、脈沖數(shù)2次、脈沖時(shí)長5 ms、傳代時(shí)間24 h時(shí)可達(dá)到較高的電轉(zhuǎn)染率。 

【文章來源】：生物化工. 2020,6(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同電壓條件對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7電轉(zhuǎn)染效率的影響

當(dāng)電脈沖次數(shù)為2次，電脈沖時(shí)長為5 ms，電壓值為150 V，按照表2中的質(zhì)粒濃度進(jìn)行電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。由單因素方差分析可知，質(zhì)粒濃度為1.176μg/μL條件下獲得最大轉(zhuǎn)染效率為66.20%±2.48%；從圖2中可觀察出隨著質(zhì)粒濃度的不斷提高（0.377～0.985μg/μL），轉(zhuǎn)染效率相應(yīng)提高，但當(dāng)質(zhì)粒濃度為1μg/μL左右（0.985～1.176μg/μL）時(shí)，由獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析可知，質(zhì)粒濃度的變化對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的影響不顯著（P>0.05），提示電轉(zhuǎn)染時(shí)質(zhì)粒濃度存在飽和性問題，1μg/μL很可能是其閾濃度。2.3 電脈沖次數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響

當(dāng)電脈沖時(shí)長為5 ms，質(zhì)粒濃度為1.176μg/μL，電壓值為150 V，按照表3中的電脈沖次數(shù)進(jìn)行電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。由單因素方差分析可知，脈沖次數(shù)為2次時(shí)獲得最大轉(zhuǎn)染效率66.20%±2.48%；由圖3和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析結(jié)果可知，脈沖次數(shù)為2時(shí)與1次及3次時(shí)的轉(zhuǎn)染效率差異均有顯著性意義（P<0.05）。2.4 電脈沖時(shí)長對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響


本文編號(hào)：3250961