近些年來,RNA研究領(lǐng)域特別是環(huán)狀RNA算是目前生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的新興熱點方向之一,RNase R的活性直接影響其處理后環(huán)狀RNA的質(zhì)量,因此RNase R的生產(chǎn)和純化值得深入的研究。核糖核酸外切酶R（RNase R）可降解幾乎所有的線性RNA分子和Y結(jié)構(gòu)RNA,但不易降解環(huán)形RNA（circRNA）、套索結(jié)構(gòu)（lariat RNA）和3’突出末端少于7個核苷酸的雙鏈RNA分子,因此可以構(gòu)建內(nèi)含子cDNA文庫用于可變剪切研究。本研究從NCBI基因庫找到了來源于大腸桿菌的核糖核酸酶R,從GDMCC購得含目的基因的菌株E.coli K12,提取基因組并以此為模板進(jìn)行PCR,獲得了目的基因。本研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下:對目的基因rnr通過PCR進(jìn)行擴(kuò)增,并構(gòu)建重組質(zhì)粒pET22b-rnr;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中,篩選出重組大腸桿菌BL21（DE3）/pET22b-rnr。在LB培養(yǎng)基中對重組菌進(jìn)行誘導(dǎo)以表達(dá)酶蛋白,通過SDS-PAGE分析其分子量大小。通過Ni柱親和層析得到純化的重組RNase R,并用釀酒酵母Total RNA作為底物進(jìn)行酶活性測定,通過和RNase R... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RNaseⅡ、RNaseR和PNPase的結(jié)構(gòu)

RNaseR的結(jié)構(gòu)和示意模型

tmRNA-SmpB調(diào)節(jié)RNaseR活性示意圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分子伴侶協(xié)助下抗腫瘤抗生素美達(dá)霉素生物合成中的糖基轉(zhuǎn)移酶Med-ORF8的原核表達(dá)[J]. 萬娟,鄧會群,張碧乾,王蔚,蔡曉鳳,李愛英.  微生物學(xué)通報. 2011(02)



本文編號：3079915