辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）是一種來源于辣根的分泌型植物過氧化物酶,在醫(yī)學診斷、檢測分析、生物修復(fù)等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用,市場需求量大。然而,目前該酶的工業(yè)生產(chǎn)方法主要是直接從辣根中提取制備,工藝復(fù)雜且成本較高。此外,分離提取的天然HRP為含40多種同工酶的混合物,無法獲得大量單一組分的酶,一定程度上影響了酶制劑的質(zhì)量,并且限制了對HRP結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)研究。因此,研究利用合適的重組表達系統(tǒng)生產(chǎn)制備高催化活性的單一型HRP具有重要的理論意義和工業(yè)應(yīng)用價值。辣根天然HRP中C1A同工酶的含量最為豐富且活性高,本研究遂以HRP C1A為研究對象,開展異源表達實驗及基礎(chǔ)應(yīng)用研究。論文的主要研究成果如下:（1）實現(xiàn)了 HRP C1A在大腸桿菌中的異源重組表達,然而未能獲得可溶性表達,重組酶基本全部存在于無活性的、不可溶包涵體中。對包涵體形式的HRP C1A進行了變復(fù)性研究,利用兩步滴加稀釋超速離心法,通過摸索復(fù)性條件,建立出優(yōu)化的重折疊緩沖液體系（含0.4 mmol·L-1 GSSG,0.05 mmol·L-1 DTT,10%（v/v）甘油,1.7 mol... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

辣根植物及其根部的示意圖

辣根過氧化物酶同工酶C1A的三維結(jié)構(gòu)圖

辣根過氧化物酶同工酶C1A的血紅素基團及其關(guān)鍵氨基酸殘基Fig.1-3ThehemegroupofHRPC1Aanditskeyaminoacidresidues


本文編號：3079506