【摘要】：南瓜多糖是一種棕色粉末狀的固體,是南瓜植物(Cucurbita moschata)中具有特殊生物活性的有效成分。南瓜多糖具有提高機體的免疫功能、抗氧化等生物活性。它的抗氧化活性體現(xiàn)在,能清除生命有機體在代謝過程中產(chǎn)生的許多自由基,包括超氧陰離子自由基(O_2~-·)、羥自由基(·OH)及其活性衍生物(H_2O_2)等。本文以本地菜市場購得的南瓜(蜜本南瓜)為原料,對南瓜多糖的提取、分離純化、不同取代度的化學(xué)修飾、結(jié)構(gòu)分析、抗氧化活性等方面進行了系統(tǒng)的研究,具體內(nèi)容如下:1.通過實驗條件及設(shè)施等方面考慮,本文采用熱水浸提法提取南瓜多糖。接著采用Sevage方法脫去多糖中的蛋白,最終經(jīng)過透析、恒溫干燥得到南瓜多糖(P)。通過苯酚-硫酸法測定多糖含量,可以達到81.0%,說明熱水提取方法以及使用Sevage方法脫蛋白方法是可行的。經(jīng)過對紅外光譜結(jié)果分析,可以初步說明南瓜多糖中的糖鏈,是由呋喃糖和吡喃糖組成的,并且有α-糖苷鍵。2.通過使用HSO_3Cl-吡啶、POCl_3-吡啶法,對南瓜多糖結(jié)構(gòu)進行化學(xué)修飾,分別制備了兩種不同取代度的硫酸酯化南瓜多糖(SP-1,SP-2)和磷酸酯化南瓜多糖(PP-1,PP-2)。SP-1和SP-2的取代度分別為0.35和0.65。PP-1和PP-2的取代度分別為0.01和0.02。然后分別對四種化學(xué)修飾產(chǎn)物,進行了糖含量、取代度、紅外光譜和核磁共振碳譜的測定。經(jīng)過測定實驗證明,成功制備了不同取代度的硫酸酯化南瓜多糖和磷酸酯化南瓜多糖。3.使用紫外分光光度計,分別對南瓜多糖及其不同取代度的硫酸化(SP-1,SP-2)和磷酸化(PP-1,PP-2)衍生物,進行了三種體外抗氧化測試(·OH清除能力、O_2~-·清除能力、還原能力),實驗采用V_C作為陽性對照。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):對于不同取代度的硫酸化產(chǎn)物而言,SP-1和SP-2對·OH的清除效果,從總體來看差別不大,但仍可以看出SP-2的清除效果較好于SP-1,可是都低于V_C和南瓜多糖的清除效果;對于O_2~-·的清除,SP-1和SP-2的清除效果都好于南瓜多糖,在較低濃度時,SP-2的清除能力和V_C相當(dāng),而且還可以明顯看出SP-2比SP-1的清除能力好;對于還原能力而言,V_C的還原能力是最好的,而SP-1和SP-2的還原能力均低于南瓜多糖。對于不同取代度的磷酸化產(chǎn)物來說,PP-1和PP-2對·OH的清除能力,均強于南瓜多糖,但均低于V_C,PP-2的EC_(50)值僅為2.4 mg/mL,而且可以明顯看出PP-2的清除能力高于PP-1。對于PP-1和PP-2清除O_2~-·的能力,V_C的清除能力仍是最好的,但PP-1和PP-2的清除能力均明顯強于南瓜多糖,在低濃度時,PP-2的清除效果好于PP-1;但在高濃度時,PP-1的清除能力明顯高于PP-2,且PP-1的EC_(50)值僅為3.0 mg/mL。對于PP-1和PP-2的還原能力而言,V_C仍具有最好的還原能力,而與南瓜多糖相比,雖然總體相差不大,但還是均低于南瓜多糖的還原能力�？傊�,南瓜多糖及其4種不同取代度的硫酸化(SP-1,SP-2)、磷酸化(PP-1,PP-2)產(chǎn)物,均制備成功。抗氧化活性實驗表明,經(jīng)過不同取代度的化學(xué)修飾,的確能增強南瓜多糖某方面的抗氧化活性,為進一步研究南瓜多糖的抗氧化活性提供了實驗依據(jù)。
【圖文】：

重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 南瓜多糖及其化學(xué)修飾產(chǎn)物的制備和結(jié)構(gòu)表征色粉末狀的南瓜多糖（P）。②在采用上述方法之前，還實驗了以水和南瓜粉以比例為 20: 1（V/m），在80 ℃下提取 90 分鐘的方法，其余步驟均不改變，與上面的提取方法相比較，提取率較低，對原料浪費的比較大，所以采用了黃老師的提取方法。2.1.3 不同取代度的硫酸酯化南瓜多糖的制備對于南瓜多糖的硫酸化修飾，該反應(yīng)就是在多糖糖鏈的殘基（某些羥基或者氨基）上引入硫酸根基團，以圖 2.1 中的反應(yīng)為例，以氯磺酸作為多糖硫酸化的主要試劑，使用氯磺酸-吡啶法對南瓜多糖進行化學(xué)修飾，讓多糖糖環(huán)上的-OH 中的-H 被-SO3H 所取代，等反應(yīng)完成之后就可以得到多糖硫酸鹽。將所得的反應(yīng)液，再進行調(diào)節(jié) pH、透析、干燥即可得到硫酸化多糖。

重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 南瓜多糖及其化學(xué)修飾產(chǎn)物的制備和結(jié)構(gòu)表征的反應(yīng)溫度下，還是 1 小時的反應(yīng)時間，，等到反應(yīng)溫度降至室溫時，仍使用 1 mol/L的 NaOH 溶液調(diào)節(jié)混合溶液的 pH，等到溶液呈中性之后，再加入 3 倍體積的無水乙醇沉淀并過夜。次日早上再經(jīng)離心、溶解、透析、烘干等步驟就得到了 SP-2（第二次硫酸化的南瓜多糖）。2.1.4 不同取代度的磷酸酯化南瓜多糖的制備對于南瓜多糖的磷酸化修飾，其反應(yīng)就是在多糖糖鏈的殘基（某些羥基等基團）上引入磷酸根基團，以圖 2.2 中的南瓜多糖磷酸化反應(yīng)為例，以三氯氧磷作為多糖磷酸化的主要試劑，使用三氯氧磷-吡啶法對南瓜多糖進行化學(xué)修飾，讓多糖糖環(huán)上的-OH 中的-H 被-PO3H2所取代，等反應(yīng)完成之后，再經(jīng)透析、干燥就可以得到磷酸化南瓜多糖。
【學(xué)位授予單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q946

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