目前,霉菌毒素污染谷物食品和奶制品的現(xiàn)象較為普遍,黃曲霉毒素M1(AFM1)和赭曲霉毒素A(OTA)是奶及奶制品中常見的兩種霉菌毒素,玉米赤霉烯酮(ZEA)是玉米及其它谷物中污染最為嚴(yán)重的霉菌毒素,在奶及奶制品中也存在。當(dāng)腸道作為抵抗外來有害物質(zhì)的第一道防線時(shí),腸道細(xì)胞會(huì)受到高濃度的霉菌毒素危害,從而造成腸功能損傷。肝臟屬于機(jī)體的主要免疫、解毒和消化器官,也會(huì)暴露于霉菌毒素,對機(jī)體健康產(chǎn)生負(fù)面影響。隨著人們生活方式的改變,奶及奶制品和谷物也成為家庭常見的食物,AFM1、OTA與ZEA在人體內(nèi)的暴露風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。因此,本文利用免疫熒光、透射電鏡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法以及間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分析了AFM1、OTA和ZEA對腸上皮細(xì)胞Caco-2/HT29-MTX緊密連接蛋白定位和黏蛋白分泌的影響。同時(shí),采用代謝組學(xué)方法研究了AFM1、OTA及其混合物對小鼠肝臟和HepG2細(xì)胞代謝的影響。主要結(jié)果如下:一,AFM1、OTA和ZEA處理Caco-2/HT29-MTX細(xì)胞后,會(huì)增強(qiáng)腸上皮細(xì)胞的通透性。霉菌毒素處理也會(huì)明顯改變緊密連接蛋白(TJ蛋白)的形態(tài),破壞TJ蛋白的結(jié)構(gòu)�；旌厦咕舅貙︷さ鞍�...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
碩士學(xué)位論文評閱人、答辯委員會(huì)簽名表
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 AFM1、OTA和 ZEA的概述
        1.1.1 AFM1、OTA和 ZEA的理化性質(zhì)
        1.1.2 AFM1、OTA和 ZEA的毒性及致病性
        1.1.3 AFM1、OTA 和 ZEA 的污染概況
    1.2 AFM1、OTA和 ZEA的腸道毒性研究進(jìn)展
        1.2.1 腸道結(jié)構(gòu)及其屏障功能
        1.2.2 AFM1、OTA和 ZEA對腸屏障功能的影響
    1.3 霉菌毒素的肝臟毒性研究進(jìn)展
    1.4 代謝組學(xué)技術(shù)在肝臟毒理學(xué)中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的及意義
    1.6 本研究的研究內(nèi)容
第二章 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞屏障功能和黏蛋白分泌的影響
    2.1 試驗(yàn)試劑和材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和處理
        2.2.2 TEER值檢測
        2.2.3 示蹤劑滲透量測量試驗(yàn)
        2.2.4 蛋白印跡分析
        2.2.5 免疫熒光分析
        2.2.6 透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)
        2.2.7 黏蛋白基因表達(dá)的定量聚合酶鏈反應(yīng)分析(qPCR)
        2.2.8 黏蛋白的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞TEER值的影響
        2.3.2 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞通透性的影響
        2.3.3 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞TJ蛋白定位的影響
        2.3.4 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞TJ蛋白形態(tài)的影響
        2.3.5 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞黏蛋白基因的影響
        2.3.6 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細(xì)胞黏蛋白表達(dá)的影響
        2.3.7 TJ蛋白、細(xì)胞通透性、黏蛋白基因表達(dá)和分泌之間的相關(guān)性分析
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 AFM1和OTA致肝臟毒性的代謝組學(xué)研究
    3.1 試驗(yàn)材料和儀器
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 試驗(yàn)試劑
        3.1.3 試驗(yàn)儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠灌胃實(shí)驗(yàn)及樣品采集
        3.2.2 體增重及臟器指數(shù)測定
        3.2.3 血清生化指標(biāo)檢測
        3.2.4 肝臟組織病理分析
        3.2.5 肝臟的代謝組學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 單獨(dú)及聯(lián)合的AFM1、OTA對小鼠體重和肝臟指數(shù)的影響
        3.3.2 單獨(dú)及聯(lián)合的AFM1、OTA對小鼠血清生化指標(biāo)的影響
        3.3.3 單獨(dú)及聯(lián)合的AFM1、OTA對小鼠肝臟組織學(xué)變化的影響
        3.3.4 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內(nèi)代謝物譜多元統(tǒng)計(jì)分析
        3.3.5 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內(nèi)差異代謝物熱圖分析
        3.3.6 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內(nèi)代謝物整合代謝通路分析
        3.3.7 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內(nèi)差異代謝物維恩分析
        3.3.8 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內(nèi)顯著代謝物分析
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 AFM1和OTA致 Hep G2 細(xì)胞毒性的代謝組學(xué)研究
    4.1 試驗(yàn)試劑和材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)和處理
        4.2.2 CCK-8試驗(yàn)
        4.2.3 細(xì)胞代謝組學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 單獨(dú)及聯(lián)合的AFM1、OTA對 Hep G2 細(xì)胞活性的影響
        4.3.2 單獨(dú)及聯(lián)合的AFM1、OTA對 Hep G2 細(xì)胞內(nèi)差異代謝物的影響
    4.4 討論與小結(jié)
第五章 主要結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3837284