霉菌毒素是真菌分泌的具有劇毒的代謝產(chǎn)物,普遍分布在土壤中,很容易污染作物與食物,曲霉毒素中黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）污染面最廣泛,常常能在天然食品中被檢測(cè)到,因此對(duì)其毒性的研究備受重視。研究表明,肝臟作為黃曲霉毒素的靶器官,在低劑量的AFB1作用下就能夠造成肝臟功能的嚴(yán)重?fù)p傷。目前對(duì)于AFB1誘導(dǎo)細(xì)胞自噬發(fā)生的研究主要集中在免疫細(xì)胞以及肉雞的肝臟中,關(guān)于AFB1影響人肝細(xì)胞自噬及其發(fā)生機(jī)制的研究尚未見。本文意在使用人肝細(xì)胞HepG2細(xì)胞,研究AFB1對(duì)其自噬水平及其自噬流的影響。在研究過程中發(fā)現(xiàn),AFB1導(dǎo)致HepG2細(xì)胞內(nèi)自噬小體增加,并在自噬流后期發(fā)生了阻斷。由于溶酶體在自噬小體降解過程中發(fā)揮著重要的作用,為探討AFB1引發(fā)自噬流后期阻斷的原因,我們深入研究了AFB1對(duì)溶酶體造成的損傷,進(jìn)而揭示AFB1阻斷HepG2細(xì)胞自噬流的具體機(jī)制。最后我們檢測(cè)了AFB1對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響,并分析了AFB1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與溶酶體損傷的關(guān)系。本文為AFB1引發(fā)肝細(xì)胞損傷機(jī)制的研究提供了新思路,對(duì)AFB1的危害評(píng)估和危險(xiǎn)防御具有重要的價(jià)值與意義。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度AFB1處理(a)24h、(b)48h后HepG2細(xì)胞活性Figure2.1CellviabilityofHepG2CellaftertreatedwithdifferentconcentrationofAFB1(a)for24hoursand(b)for48hours.(**p<0.01vsControl)

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文24圖2.2經(jīng)AFB1處理后HepG2細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)記性蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)量分別使用10μM、20μM、40μMAFB1處理細(xì)胞3h(a)、6h(b)、12h(c)后檢測(cè)蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)情況;(d)HepG2細(xì)胞使用20μMAFB1處理3h、6h、12h后蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)情況Figure2.2ExpressionoftheAutophagymakerproteinLC3-ⅡinHepG2cellaftertreatedwithAFB1Cellwereincubatedwith10μM、20μM、40μMAFB1for3h(a),6h(b),12h(c)todetectedthelevelofLC3-Ⅱ;(d)Cellweretreatedwith20μMAFB1for3h、6h、12htodetectedthelevelofLC3-Ⅱ.(*p<0.05,**p<0.01vsControl)

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖2.3在不同處理?xiàng)l件下MDC的熒光強(qiáng)度(a)熒光顯微鏡下（200×）觀察細(xì)胞MDC染色情況；(b)各組細(xì)胞內(nèi)MDC熒光表達(dá)定量分析。Figure2.3TheexpressionofMDCfluorescenceintensityunderdifferentprocessingconditions(a)MDCstainingwasobtainedbyfluorescencemicroscope(200×)；(b)QuantitativeanalysisofMDCfluorescenceexpressionineachgroupofcells.（*p<0.05vsControl,**p<0.01vsContrl,ns:notsignificantvsCQ）2.4.4透射電鏡觀察自噬小體形成我們想要更加直觀的證明AFB1能夠引起HepG2細(xì)胞自噬小體數(shù)量的變化，透射電鏡（TEM）能夠清晰的顯示出細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，更加直接地反映出細(xì)胞中自噬小體數(shù)量以及形態(tài)的變化。HepG2細(xì)胞使用20μMAFB1處理6h后與空白

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3503506