牛乳是人們?nèi)粘Ｉ钪斜容^普遍的蛋白質(zhì)來(lái)源之一,同時(shí)也被WHO認(rèn)定為人類食物過(guò)敏的八大類食品之一。酪蛋白（CN）、β-乳球蛋白（β-LG）和α-乳白蛋白（α-LA）被認(rèn)為是牛乳中的主要過(guò)敏原,目前還沒(méi)有一個(gè)可以有效治療牛乳過(guò)敏的手段。而開展針對(duì)乳及乳制品主要過(guò)敏原酪蛋白（CN）、β-乳球蛋白（β-LG）和α-乳白蛋白（α-LA）的檢測(cè),能夠?yàn)槿榧叭橹破愤^(guò)敏原標(biāo)識(shí)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供理論支撐和技術(shù)支持,也為易感特殊人群的健康提供保障。本論文主要研究了牛乳中三種主要過(guò)敏原酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白兔多克隆抗體的制備及性能鑒定、單克隆抗體的制備及性能鑒定、雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及方法學(xué)評(píng)價(jià)。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1、酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白兔多克隆抗體的制備及鑒定以牛乳主要過(guò)敏原酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白作為免疫抗原,與弗氏佐劑等量混合后,采用頸背部皮下注射的免疫方式對(duì)健康的新西蘭大白兔進(jìn)行免疫,制備的兔血清通過(guò)辛酸-飽和硫酸銨沉淀法純化分離后,分別采用SDS-PAGE凝膠電泳鑒定純度、間接ELISA法測(cè)定效價(jià)。結(jié)果表明,本研究成功制備高純度抗酪蛋白、α-乳白蛋... 

【文章來(lái)源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章CN、α-LA和β-LG兔多克隆抗體的制備及鑒定19圖2-1酪蛋白（上）、α-乳白蛋白（中）、β-乳球蛋白（下）四免兔血清效價(jià)大白兔在第二次免疫后，進(jìn)行耳靜脈采血（如遇冷天，可進(jìn)行耳動(dòng)脈采血），采用間接ELISA方法測(cè)定其效價(jià)，原則上選擇效價(jià)高的兔子進(jìn)行進(jìn)行兔多克隆抗體血清的收集。由于初次免疫效價(jià)較低，從第二次免疫開始分別檢測(cè)免疫酪蛋

第2章CN、α-LA和β-LG兔多克隆抗體的制備及鑒定上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文20白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的2只大白兔血清效價(jià)，結(jié)果見(jiàn)圖2-1。從圖2-1可以看出，免疫酪蛋白抗原第四次免疫1#兔血清效價(jià)最高，可達(dá)到1:729000，免疫α-乳白蛋白和β-乳球蛋白抗原第四次免疫后均是2#兔血清效價(jià)最高，效價(jià)均達(dá)到1:729000。2.4.2兔多克隆抗體純度的測(cè)定兔免疫血清經(jīng)過(guò)辛酸-飽和硫酸銨方法純化后，采用SDS-PAGE凝膠電泳對(duì)其進(jìn)行純度鑒定，以確定所得到的兔多抗具有較高的純度。其結(jié)果如下圖2-2所示，抗酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白兔多抗輕鏈和重鏈清晰可見(jiàn)，重鏈蛋白分子量在50kD左右，說(shuō)明了抗酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白兔多抗純度較高。圖2-2兔多抗SDS-PAGE電泳結(jié)果圖（M：低分子量蛋白Marker；1：酪蛋白多抗；2：α-乳白蛋白多抗；3：β-乳球蛋白多抗）2.4.3兔多克隆抗體濃度的測(cè)定根據(jù)BCA法測(cè)蛋白法制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2-1所示，標(biāo)準(zhǔn)方程為：y=0.10803x+0.41048，R2=0.99646，通過(guò)計(jì)算可得酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白多抗?jié)舛热绫?-3，可以看出所制備的三種多抗?jié)舛染^高（＞6mg/mL）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)中藥材中黃曲霉毒素B1的定量檢測(cè)研究[J]. 李耀磊,劉麗娜,姚云,趙小旭,周霞,金紅宇,馬雙成.  中國(guó)藥學(xué)雜志. 2019(17)
[2]基于金納米花標(biāo)記的免疫層析法檢測(cè)牛奶中黃曲霉毒素M1[J]. 金玉,劉仁榮,裘雪梅.  食品研究與開發(fā). 2019(13)
[3]膠體金免疫層析法快速測(cè)定蜂膠及蜂膠乙醇提取物中氯霉素殘留[J]. 周萍,李櫻紅,尹志紅,呂澤田,尹君,王靜,徐初.  中國(guó)蜂業(yè). 2019(05)
[4]草魚過(guò)敏原蛋白質(zhì)的分離及其免疫學(xué)特性初步鑒定[J]. 陳獻(xiàn)雄,鄔玉蘭,劉志剛.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(01)
[5]動(dòng)物過(guò)敏原牛血清白蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 朱業(yè)培,王瑋,呂青骎,錢行,徐幸蓮,周光宏.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(02)
[6]牛奶過(guò)敏原β-乳球蛋白的單克隆抗體制備及其雙抗體夾心法的建立[J]. 陳獻(xiàn)雄,鄔玉蘭,吉瓊梅,楊平常,劉志剛.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2015(11)
[7]食品過(guò)敏原快速檢測(cè)技術(shù)方法研究進(jìn)展[J]. 曾穎,蔡瑋紅.  包裝與食品機(jī)械. 2015(03)
[8]過(guò)敏性疾病患者過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析[J]. 楊德平.  國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2015(07)
[9]中國(guó)312歲兒童自報(bào)食物過(guò)敏與食物不耐受的相關(guān)因素分析[J]. 張雅蓉,陳云,趙艾,李宏亮,母智深,張玉梅,王培玉.  衛(wèi)生研究. 2015(02)
[10]熒光微球免疫層析法定量檢測(cè)牛乳中酪蛋白[J]. 楊亞杰,倪小琴,王茜,游瓊,張富生,賴衛(wèi)華.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2014(07)

博士論文
[1]四類重要抗生素殘留的免疫快速檢測(cè)方法的研究[D]. 陳燕妮.江南大學(xué) 2017
[2]水產(chǎn)品中三類重要化學(xué)殘留物快速檢測(cè)方法的研究[D]. 徐乃豐.江南大學(xué) 2015
[3]擬除蟲菊酯類農(nóng)藥免疫快速檢測(cè)方法及其定量構(gòu)效模型的建立[D]. 陳秀金.江南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]TGEV單克隆抗體及抗原檢測(cè)膠體金試紙條的制備[D]. 王一鵬.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]澳洲堅(jiān)果過(guò)敏原免疫分析方法的建立與應(yīng)用[D]. 周柔柔.天津科技大學(xué) 2018
[3]金磁酶聯(lián)免疫法檢測(cè)牛乳過(guò)敏原酪蛋白、α-乳白蛋白的研究[D]. 潘麗.上海師范大學(xué) 2016
[4]抗GNA兔單克隆抗體的制備及其夾心ELISA檢測(cè)體系的建立[D]. 沈金兒.浙江大學(xué) 2013
[5]農(nóng)藥2，4-D與通用Ⅱ型擬除蟲菊酯完全抗原和多克隆抗體制備[D]. 許嘯晨.上海師范大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3499782