甲基乙二醛（methylglyoxal,MGO）來源于異常的糖酵解和食物,是晚期糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products,AGEs）的前體。MGO可與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸發(fā)生非酶促反應(yīng)形成AGEs,MGO與AGEs既可通過飲食獲得,也可以在體內(nèi)生成。人體中MGO和AGEs的積累參與了多種病理學(xué)的發(fā)展,例如神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、動脈粥樣硬化和糖尿病等。隨著人口的老齡化,神經(jīng)退行性疾病發(fā)病率逐年上升,已經(jīng)成為全球性的健康問題。抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性可能是治療神經(jīng)退行性疾病的潛在方法。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）主要來源于綠茶,有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種活性,然而EGCG是否能夠抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性及抑制AGEs生成需要進(jìn)一步探討。本研究利用大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞（rat adrenal pheochromocytoma,PC12）模型進(jìn)行實驗,探究EGCG是否能夠抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷。通過MTT法確定EGCG的安全濃度和MGO、AGEs的損傷濃度... 

【文章來源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
第1章 引言
    1.1 甲基乙二醛(MGO)
        1.1.1 MGO的體內(nèi)和體外來源
        1.1.2 MGO體內(nèi)代謝
        1.1.3 MGO的神經(jīng)毒性
    1.2 晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)
        1.2.1 AGEs的種類和結(jié)構(gòu)
        1.2.2 AGEs的生成途徑
        1.2.3 AGEs體內(nèi)和體外來源
        1.2.4 AGEs的代謝
        1.2.5 AGEs的神經(jīng)毒性
    1.3 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)
    1.4 本課題研究意義
    1.5 本課題研究內(nèi)容
        1.5.1 EGCG抑制MGO對 PC12 細(xì)胞損傷作用研究
        1.5.2 EGCG抑制MGO誘導(dǎo)BSA生成AGEs
        1.5.3 EGCG抑制AGEs對 PC12 細(xì)胞損傷作用研究
第2章 EGCG抑制MGO對 PC12 細(xì)胞損傷作用研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株、生化試劑和耗材
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 試劑配制
    2.2 實驗方法及步驟
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.1.2 細(xì)胞換液
            2.2.1.3 細(xì)胞傳代
            2.2.1.4 細(xì)胞凍存
        2.2.2 細(xì)胞計數(shù)
        2.2.3 EGCG濃度的選擇
        2.2.4 MGO濃度的選擇
        2.2.5 細(xì)胞分組
        2.2.6 細(xì)胞存活率檢測
        2.2.7 ROS水平檢測
        2.2.8 線粒體膜電位檢測
        2.2.9 細(xì)胞凋亡檢測
        2.2.10 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.11 細(xì)胞總蛋白濃度測定
        2.2.12 細(xì)胞核蛋白提取
        2.2.13 細(xì)胞核蛋白濃度測定
        2.2.14 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)
        2.2.15 數(shù)據(jù)分析
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 EGCG安全濃度的確定
        2.3.2 MGO濃度的確定
        2.3.3 EGCG對 MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞存活率降低的影響
        2.3.4 EGCG對 MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞ROS水平升高的影響
        2.3.5 EGCG對 MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞線粒體膜電位水平降低的影響
        2.3.6 EGCG對 MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞凋亡的影響
        2.3.7 EGCG對 MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞GLO1 蛋白表達(dá)的影響
        2.3.8 EGCG對 PC12 細(xì)胞MAPK信號通路的影響
        2.3.9 EGCG對 PC12 細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響
        2.3.10 EGCG對 PC12 細(xì)胞NF-κB信號通路的影響
        2.3.11 EGCG對 PC12 細(xì)胞ERK/CREB/BDNF信號通路的影響
    2.4 討論與小結(jié)
第3章 EGCG抑制AGEs生成研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 生化試劑和耗材
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法及步驟
        3.2.1 BSA-MGO體系建立
        3.2.2 熒光光譜測定
        3.2.3 紫外光譜測定
        3.2.4 圓二色譜測定
        3.2.5 分子對接
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 AGEs檢測
        3.3.2 EGCG對 AGEs形成的抑制作用
        3.3.3 EGCG與 BSA的分子對接研究
    3.4 討論與小結(jié)
第4章 EGCG抑制AGEs對 PC12 細(xì)胞損傷作用研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細(xì)胞株、生化試劑和耗材
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
        4.1.3 試劑配制
    4.2 實驗方法及步驟
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 制備AGEs
        4.2.3 EGCG濃度的選擇
        4.2.4 AGEs濃度的選擇
        4.2.5 細(xì)胞分組
        4.2.6 細(xì)胞存活率檢測
        4.2.7 ROS水平檢測
        4.2.8 線粒體膜電位檢測
        4.2.9 細(xì)胞凋亡檢測
        4.2.10 細(xì)胞總蛋白提取
        4.2.11 細(xì)胞總蛋白濃度測定
        4.2.12 細(xì)胞核蛋白提取
        4.2.13 細(xì)胞核蛋白濃度測定
        4.2.14 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)
        4.2.15 數(shù)據(jù)分析
    4.3 研究結(jié)果
        4.3.1 AGEs濃度的確定
        4.3.2 EGCG對 AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞存活率降低的影響
        4.3.3 EGCG對 AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞ROS水平升高的影響
        4.3.4 EGCG對 AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞線粒體膜電位水平降低的影響
        4.3.5 EGCG對 AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.6 EGCG對 PC12 細(xì)胞RAGE蛋白表達(dá)的影響
        4.3.7 EGCG對 PC12 細(xì)胞MAPK信號通路的影響
        4.3.8 EGCG對 PC12 細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響
        4.3.9 EGCG對 PC12 細(xì)胞NF-κB信號通路的影響
        4.3.10 EGCG對 PC12 細(xì)胞ERK/CREB/BDNF信號通路的影響
    4.4 討論與小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3470856