麥芽低聚糖是一種功能性糖源,由2¹0個葡萄糖單元以α-1,4-糖苷鍵連接而成,具有良好的理化性質(zhì)和特殊的生理功效,在食品及醫(yī)藥領(lǐng)域中有著越來越廣泛的應(yīng)用。麥芽低聚糖生成酶（Maltooligosaccharide-forming amylase,MFA酶）是工業(yè)制備麥芽低聚糖的主要酶制劑。目前已有多種不同來源的MFA酶實(shí)現(xiàn)了異源表達(dá),但分泌量普遍較低,限制了該酶的工業(yè)應(yīng)用。同時,對MFA酶結(jié)構(gòu)與功能的研究尚且有限,因此,研究其催化機(jī)制及構(gòu)效關(guān)系對酶的深入研究和分子改造具有重要意義。本課題以來源于Pseudomonas saccharophila STB07的MFA酶(MFA_ps酶)為研究對象,首先,分別構(gòu)建了MFA_ps酶的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了酶的胞外過表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn),Bacillus subtilis WB600是表達(dá)MFA_ps酶的最佳體系,搖瓶培養(yǎng)72 h后發(fā)酵液酶活達(dá)144.60 U/mL,比文獻(xiàn)報道水平提高了13.7倍,比酶活為980.49 U/mg;MFA

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MFA酶的水解模式

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文FA 酶晶體結(jié)構(gòu)的研究現(xiàn)狀 蛋白質(zhì)的結(jié)晶與結(jié)構(gòu)解析蛋白質(zhì)的結(jié)晶對蛋白濃度和純度有極高的要求，必須建立在蛋白質(zhì)實(shí)現(xiàn)高礎(chǔ)上。結(jié)晶是指蛋白質(zhì)分子從過飽和溶液中析出，由隨機(jī)分布狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榫w的過程，包括了晶核形成和晶體生長兩個過程[45]。通常，結(jié)晶方法可晶法、透析法、液相擴(kuò)散法和氣相擴(kuò)散法。結(jié)晶時最常用到的懸滴法(圖 1-相擴(kuò)散法，將高濃度蛋白質(zhì)溶液(10~200mg/mL)懸于沉淀劑溶液上方，在，通過密閉體系中蛋白質(zhì)溶液蒸汽與沉淀劑溶液蒸汽的相互擴(kuò)散而使蛋白接近過飽和狀態(tài)，當(dāng)達(dá)到較高的飽和度時，蛋白質(zhì)自發(fā)沉淀，堆棧形成晶體

圖 3-1 表達(dá)載體 mfaps/pET-20b(+)的構(gòu)建Fig. 3-1 Construction of mfaps/pET-20b(+)圖 3-2 表達(dá)載體 mfaps/pET-20b(+)的酶切電泳驗(yàn)證M：DNA 相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：Nde I 和 Xho I 雙酶切表達(dá)載體 mfaps/pET-20b(+)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)及研究進(jìn)展[J]. 苗苗,黃昆侖,梁志宏.  食品工業(yè)科技. 2017(18)
[2]枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)及其啟動子研究進(jìn)展[J]. 余小霞,田健,劉曉青,伍寧豐.  生物技術(shù)通報. 2015(02)
[3]溫度對β-甘露聚糖酶在畢赤酵母中表達(dá)的影響[J]. 周洪波,林福來,鄭甲,郭寧,吳俊子,吳麗雙,邱冠周.  當(dāng)代化工. 2013(04)
[4]畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)[J]. 韓雪清,劉湘濤,尹雙輝.  微生物學(xué)雜志. 2003(04)
[5]麥芽四糖的性質(zhì)及在食品中的應(yīng)用[J]. 朱明,吳嘉根.  冷飲與速凍食品工業(yè). 1999(04)

博士論文
[1]靜電相互作用對淀粉分支酶熱穩(wěn)定性影響的研究[D]. 班宵逢.江南大學(xué) 2017
[2]β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在枯草桿菌中的分泌表達(dá)及其熱穩(wěn)定性研究[D]. 李才明.江南大學(xué) 2014
[3]軟化類芽孢桿菌α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在大腸桿菌中的表達(dá)及其產(chǎn)物特異性分析[D]. 李兆豐.江南大學(xué) 2009

碩士論文
[1]軟化芽孢桿菌α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在畢赤酵母和枯草桿菌中的表達(dá)[D]. 張佳瑜.江南大學(xué) 2010



本文編號：3322413