臘八蒜黃色素作為一種天然的黃色素具有很大的應(yīng)用潛力,近年來(lái)對(duì)臘八蒜黃色素的形成進(jìn)行了初步探索,但其形成途徑和結(jié)構(gòu)仍屬于推測(cè)階段。研究臘八蒜黃色素的結(jié)構(gòu),揭示其穩(wěn)定性和細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制對(duì)于臘八蒜黃色素的加工利用具有重要意義。本課題在前人的研究基礎(chǔ)上取得如下進(jìn)展:(1)以黃色臘八蒜蒜泥為原料,通過(guò)溶劑浸提法提取臘八蒜黃色素,結(jié)合醇沉、萃取、柱層析技術(shù)去除雜質(zhì),并通過(guò)液相色譜進(jìn)一步分離純化。采用紫外分光光度計(jì)和超高效液相色譜質(zhì)譜技術(shù)(UHPLC-MS)進(jìn)行鑒定分析。臘八蒜黃色素在440 nm處具有一個(gè)特征吸收峰,相對(duì)分子質(zhì)量為228。(2)采用熱重分析法(TGA)、差式掃描量熱法(DSC)和體外消化模擬法揭示了臘八蒜黃色素的熱穩(wěn)定性和胃腸消化中的穩(wěn)定性。臘八蒜黃色素在T≤140℃和174℃≤T≤244℃存在兩次失重,其降解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)。構(gòu)建了黃色素降解動(dòng)力學(xué)模型,能夠預(yù)測(cè)臘八蒜黃色素在不同時(shí)間和溫度的降解趨勢(shì)。臘八蒜黃色素在胃消化和腸消化中分別降解了14.82%和35.51%,黃色素在腸道環(huán)境中更不穩(wěn)定。(3)建立了Caco-2細(xì)胞模型,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、跨膜電阻值和熒光素鈉通量三個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)驗(yàn)證細(xì)胞模型可用于轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)。當(dāng)臘八蒜黃色素濃度小于5 mg/mL時(shí),黃色素對(duì)Caco-2細(xì)胞無(wú)毒性作用。進(jìn)一步研究色素濃度、轉(zhuǎn)運(yùn)方向、時(shí)間和抑制劑對(duì)臘八蒜黃色素轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。在試驗(yàn)濃度和時(shí)間內(nèi),臘八蒜黃色素的累積轉(zhuǎn)運(yùn)量與轉(zhuǎn)運(yùn)濃度和時(shí)間成正比,轉(zhuǎn)運(yùn)方式以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主,其P_(app)(AP-BL)為1.30×10~-55 cm·s~(-1),說(shuō)明其在體內(nèi)吸收度良好。轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中可能存在外排蛋白的介導(dǎo),且受能量抑制劑影響,但不受到P-糖蛋白和多藥耐藥蛋白的介導(dǎo)。
【學(xué)位單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：TS264.4
【部分圖文】：

圖 2-1 黃色蒜泥Fig. 2-1 Yellow crushed garlic提取 4~5）作為提取溶劑，料液比為 1:4（g/mL蒜泥殘?jiān)螅D(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮后溶液。分離純化糖和蛋白溶液中添加乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為 80%以均勻后靜置 30 min，12000 r/min 離心 20 濃縮備用。脫脂酸乙酯以 1：1（v/v）的比例在分液漏斗 3 次，以除去溶液中的脂溶性化合物。離純化臘八蒜黃色素吸附樹(shù)脂對(duì)臘八蒜黃色素進(jìn)行分離純化。

0 5 10 15 200.00.51.01.52.00mmAU時(shí)間（min）440 nm圖 2-4 純化后臘八蒜黃色素的液相色譜圖iquid chromatogram of the yellow pigment after 構(gòu)鑒定技術(shù)可以提供所測(cè)化合物的相對(duì)分子質(zhì)量蒜黃色素的總離子流圖及相應(yīng)色譜圖如圖離子流峰。臘八蒜黃色素的一級(jí)質(zhì)譜圖29.0981 的分子離子峰，及其附近的同位。由于正離子模式，因此臘八蒜黃色素的H、O、N 組成的化合物，分子離子峰的索推測(cè)分子式為 C13H12N2O2。

圖 2-6 臘八蒜黃色素的一級(jí)質(zhì)譜圖Fig. 2-6 Mass spectrum of the “Laba” yellow pigmentWang D 和 Hu D 等人通過(guò)使用吡咯基甘氨酸、吡咯基纈氨酸、吡咯基異亮氨酸基琥珀酸以及吡咯基戊二酸與丙酮酸反應(yīng)可以制得黃色素，制得黃色素的相對(duì)分均高于本試驗(yàn)鑒定出的黃色素相對(duì)分子質(zhì)量，由此推測(cè)與本試驗(yàn)中檢測(cè)到的不是臘八蒜黃色素。為進(jìn)一步分析臘八蒜黃色素分子離子峰的結(jié)構(gòu)，在正離子模式下，選擇準(zhǔn)分子作為母離子，通過(guò)不斷增加碰撞能量加強(qiáng)氣體對(duì)正離子的碰撞速度，得到新的子片。圖 2-7 碰撞能量分別為 10 V、20 V、30 V 的二級(jí)質(zhì)譜圖，圖中 m/z 229 為母離撞能量為 10 V 時(shí)出現(xiàn) m/z 183 的子碎片離子，丟失了質(zhì)核比為 46 的基團(tuán)，推測(cè) 183 的子碎片離子的分子式為[C12H11N2]+。當(dāng)碰撞能量增加到 30 V 時(shí)，出現(xiàn)了新離子，其質(zhì)核比分別為 168、142 和 115，斷裂方式分別為[M-C11H8N2]+、[M-C10H[M-C9H7]+。本文通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定了臘八蒜黃色素的相對(duì)分子質(zhì)量及其碎，其結(jié)構(gòu)式需要結(jié)合紅外光譜及核磁共振進(jìn)一步表征。
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本文編號(hào)：2851398