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駝血抗氧化與降糖活性肽的制備與鑒定

發(fā)布時(shí)間:2020-08-22 09:03
【摘要】:動(dòng)物血液是畜禽屠宰加工過(guò)程中的主要副產(chǎn)品,含有豐富的蛋白質(zhì)和其他營(yíng)養(yǎng)素;由于駱駝生存在嚴(yán)酷的惡劣環(huán)境中,特殊的環(huán)境使其血液與其它動(dòng)物的血液相比,具有更為特殊的生理、營(yíng)養(yǎng)功能。然而,駝血利用率極低,造成了極大的浪費(fèi)。本研究利用酶解法制備駝血多肽,探究不同蛋白酶的駝血酶解產(chǎn)物抗氧化及降糖活性強(qiáng)弱;在此基礎(chǔ)上利用超濾、層析等方法對(duì)抗氧化與降糖肽進(jìn)行分離純化;最后對(duì)分離純化后的抗氧化與降糖肽進(jìn)行氨基酸組成、分子量分布及氨基酸序列的測(cè)定分析。主要研究結(jié)果如下:(1)胃蛋白酶在最適pH和溫度條件下,酶解時(shí)間為3 h,酶濃度為5 mg/100mg,料液比為1:10時(shí),駝血酶解產(chǎn)物有最高抗氧化活性;經(jīng)進(jìn)一步分離純化,該水解產(chǎn)物中組分Pep-1抗氧化活性最強(qiáng),其DPPH·清除率為72.6%,鐵離子螯合能力為94.9%,總抗氧化能力(ABTS法)為1.433 mmol/g。利用全自動(dòng)氨基酸分析儀對(duì)組分Pep-1進(jìn)行氨基酸組成測(cè)定發(fā)現(xiàn)其氨基酸含量為73.763 mg/100mg。利用MALDI-TOF-TOF測(cè)定組分Pep-1的分子量和氨基酸序列發(fā)現(xiàn)其主要由分子量為5107.6484 Da的肽段組成,對(duì)該肽段進(jìn)一步水解測(cè)定發(fā)現(xiàn)其主要由分子量為1223.6233 Da 的九肽組成,氨基酸序列為 Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg-Phe,大部分由疏水性氨基酸組成。(2)風(fēng)味蛋白酶在最適pH和溫度條件下,酶解時(shí)間為4 h,酶濃度為5 mg/100mg,料液比為1:6時(shí),駝血酶解產(chǎn)物有最高α-淀粉酶抑制活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性;經(jīng)進(jìn)一步分離純化確定了組分Fla-a的a-淀粉酶抑制率(66.03%)最高,Fla-b的α-葡萄糖苷酶抑制率(90.86%)最高。利用全自動(dòng)氨基酸分析儀對(duì)組分Fla-a和Fla-b進(jìn)行氨基酸組成測(cè)定發(fā)現(xiàn)Fla-a氨基酸含量為81 630mg/100mg,組分Fla-b氨基酸含量為49.126 mg/100mg。利用MALDI-TOF-TOF測(cè)定組分Fla-a和Fla-b的分子量和氨基酸序列,發(fā)現(xiàn)組分Fla-a主要由分子量為722.3637 Da的六肽組成,氨基酸序列為T(mén)yr-Pro-Gly-Glu-Thr-Arg;組分Fla-b主要由分子量為878.4473 Da的六肽組成,氨基酸序列為T(mén)yr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg。結(jié)論:本研究分離純化得到分子量為1223.6233 Da的駝血抗氧化肽Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg-Phe 以及分子量為 722.3637 Da、878.4473 Da的馬駝血降糖肽 Tyr-Pro-Gly-Glu-Thr-Arg、Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg。
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類(lèi)號(hào)】:TS201.2;TS251.93
【圖文】:

技術(shù)路線圖,降糖,活性肽,抗氧化


圖2技術(shù)路線圖逡逑Figure.2邋The邋technical邋roadmap邋in邋the邋paper逡逑

標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線,蛋白,水解度


濃度(mg/?d)逡逑圖3蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Figure.3邋Protein邋standard邋curve逡逑稱為生命體的物質(zhì)基礎(chǔ),由20多種l#基酸(amino邋acid因此種類(lèi)很多,相應(yīng)的性質(zhì)及功能各不相同。本試驗(yàn)為的分析與研究,對(duì)駝血進(jìn)行了蛋白含量檢測(cè),根據(jù)蛋白白含量為78.03%,因此可以確定駝血中發(fā)揮功能活性的白酶單因素試驗(yàn)結(jié)果逡逑同酶解時(shí)間對(duì)駝血水解度的影響逡逑知,隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),水解度整體呈現(xiàn)先上升后趨白酶在3邋h時(shí)有最大水解度,之后隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)水酶則在4邋h時(shí)有最大水解度,而后水解度的變化趨于平

酶解液,水解液,風(fēng)味蛋白酶,復(fù)合蛋白酶


Figure.7邋Camel邋blood邋and邋its邋enzymatic邋hydrolysate邋SDS-PAGE逡逑M:蛋閂標(biāo)準(zhǔn);1.駝血;2.復(fù)合蛋白酶水解液;3.木瓜蛋白酶水解液;4.風(fēng)味蛋白酶水解液;5.胃水解液逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):2800502

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