【摘要】：雌二醇是一種天然存在的類固醇雌激素,能夠通過食物鏈在人體內富集,攝入過多外源性雌二醇將會擾亂內分泌系統(tǒng),危害人體健康�，F(xiàn)有的雌二醇定量分析方法大都需要昂貴的分離分析設備和復雜的樣品預處理,而基于試紙條的雌二醇測定方法都以抗體為識別單元,無法克服如穩(wěn)定性差等抗體自身的弊端。因此,基于適配體識別技術,建立穩(wěn)定、簡便、快速、靈敏的雌二醇測定方法,對于保障食品安全具有重要意義。本論文的主要研究內容如下:(1)為克服熒光傳感易受背景信號干擾的弊端,利用長余輝納米材料發(fā)光壽命長,信噪比高的特性,基于磷光共振能量轉移原理,建立了雌二醇室溫磷光傳感方法,并應用于牛奶樣品中雌二醇的測定:通過水熱合成法制備摻雜稀土元素的長余輝納米材料;以核酸適配體對其進行表面修飾并進行結構和性質表征;以其作為能量供體,以二硫化鉬納米片作為能量受體,構建磷光共振能量轉移傳感器;在優(yōu)化的測定條件下,該傳感器在710 nm處的磷光強度與其中雌二醇濃度在0.5~1200 ng/mL范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系(R~2=0.982),檢測限為0.3 ng/mL。牛奶樣品中的加標回收率為93.6%~102.4%,證明本方法可應用于牛奶樣品中雌二醇的定量分析。采用磷光傳感方法可有效避免來自乳蛋白和共存物的熒光干擾,提高方法準確度。(2)建立了基于適配體識別-檢測區(qū)響應性變構-類夾心型側流層析試紙的雌二醇快速檢測方法,并應用于牛奶樣品中雌二醇的測定:以35 mer雌二醇適配體序列為試紙檢測區(qū)分子信標的環(huán)狀部位,樣品溶液中的雌二醇能與分子信標環(huán)狀部位結合,迫使分子信標頸部互補配對的雙鏈打開,其中一段與納米金表面修飾的DNA單鏈互補結合而使檢測區(qū)顯色。在優(yōu)化的實驗條件下,檢測區(qū)與質控區(qū)信號強度之比與雌二醇濃度在27.2~27200 ng/mL范圍內具有良好線性關系(R~2=0.920),裸眼檢測限為27.2 ng/mL。牛奶樣品中的加標回收率為89%~103%,單次測定耗時15 min,證明本方法可用于牛奶樣品中雌二醇的快速測定。以本方法測定雌二醇,較前述室溫磷光傳感法快速、簡便、但檢測限偏高。(3)為降低側流層析試紙技術的檢測限,建立了試紙檢測區(qū)預富集方法:以miR-210模擬物為模式目標物,在類夾心型和競爭型兩種檢測模式中,以檢測區(qū)預富集目標物后上載顯色信號單元,與直接上樣法相比,可視化檢測限降低了1~3個數量級且特異性沒有明顯差異。在1:1稀釋的血清樣品中,此預富集方法可得到與緩沖溶液中同樣的檢測限。此方法為降低雌二醇的側流層析檢測限提供思路。
【圖文】：

、共沉淀法、燃燒法和微波法。）溶膠-凝膠法溶膠-凝膠法的制備過程主要包括水解聚合的溶膠-凝膠、溶液脫水凝膠和絡合燥燒制三個步驟[39]。通常情況下，該方法的前體為醇鹽或金屬鹽，螯合配體為交聯(lián)劑為乙醇。由于螯合劑包裹 PLNPs 晶體的反應溫度較高，生長受到限制提升其光學性質。與高溫煅燒法相比，由于溶膠-凝膠法的反應環(huán)境為溶液，子混合更加均勻，反應溫度較低，提高了合成效率。研究者們通常利用溶膠-備以鋁酸鹽和硅酸鹽為基質的 PLNPs。Chermont 等[40]首次利用溶膠-凝膠法制光譜位于近紅外區(qū)域、尺寸大小在 50～200 nm 之間的 PLNPs，進行特定標記在生物成像領域應用效果良好。利用溶膠-凝膠法制備的 PLNPs 不僅尺寸均勻特征還可通過制備條件（如 pH 值、反應前體和配體種類、反應溫度等）的改應的控制，可以制備出納米球、納米線[41]等形狀。Fu 等[42]利用溶膠-凝膠法a5O8:Cr 長余輝納米顆粒，發(fā)現(xiàn)隨著合成溫度的不斷增加，PLNPs 的尺寸也隨之增免 PLNPs 晶體粒徑過大，發(fā)展了溶膠-凝膠-微波法[43]和溶膠-凝膠-燃燒法[44，制備的 PLNPs 晶形完整，尺寸均勻。

圖 1-2 水熱法制備長余輝納米材料及其應用[45]atic illustration of the PLNPs sythesised by hydrothermal method and for in采用的模板一般為介孔二氧化硅納米球（MSNs），該物質在作對 PLNPs 的尺寸大小和形貌進行有效控制，使 PLNPs 的原料內沉積，煅燒后獲得 MSNs@PLNPs，粒徑大小在 50～100 nm 范模板法制備出尺寸較小的 PLNPs，可應用于分析檢測或成像領法 PLNPs 的原料溶液進行混合，加入沉淀劑后使體系中離子產后高溫煅燒即可獲得 PLNPs 晶體。由于該方法的最初步驟是在混勻提供有利條件，，因而獲得的 PLNPs 晶體更為均一。Chen制備晶型為六方多壁晶系的長余輝納米管。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TS252.7;O658.1

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本文編號：2657236