雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是衛(wèi)矛科雷公藤屬木質(zhì)藤本植物,具有資源豐富、殺蟲活性高、廣譜、對哺乳動(dòng)物安全等優(yōu)點(diǎn)。雷公藤次堿是其主要?dú)⑾x活性成分,具備開發(fā)為高效安全新型生物農(nóng)藥的潛力。然而,雷公藤次堿的殺蟲分子靶標(biāo)及作用機(jī)制至今尚不清楚。根據(jù)前期研究結(jié)果,推測雷公藤次堿作用于粘蟲的肌肉系統(tǒng),對鈣離子通道及鈣信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)有顯著影響。基于以上,本研究以粘蟲為研究對象,分別克隆了粘蟲1,4,5-三磷酸肌醇受體(IP₃R)和質(zhì)膜鈣泵(PMCA)基因,并分析了兩種基因在粘蟲中的時(shí)空表達(dá),同時(shí)利用RNAi技術(shù)驗(yàn)證了兩種鈣通道蛋白在雷公藤次堿殺蟲作用中的功能,為進(jìn)一步闡明雷公藤次堿的殺蟲作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、利用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)分別克隆了粘蟲IP₃R和PMCA基因序列,分別命名為Ms IP₃R和Ms PMCA。Ms IP₃R開放閱讀框長8118 bp,編碼2076個(gè)氨基酸,預(yù)測其蛋白分子量和等電點(diǎn)分別為304784.46和...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲的肌肉系統(tǒng)及肌肉毒劑
        1.1.1 昆蟲肌肉系統(tǒng)組成及功能
        1.1.2 昆蟲肌肉的收縮機(jī)制
        1.1.3 作用于昆蟲肌肉的殺蟲劑及其機(jī)理
    1.2 細(xì)胞的鈣離子調(diào)控
        1.2.1 鈣離子的功能
        1.2.2 三磷酸肌醇受體結(jié)構(gòu)及功能
        1.2.3 質(zhì)膜鈣ATP酶結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 雷公藤生物堿殺蟲作用研究進(jìn)展
        1.3.1 雷公藤生物堿主要化學(xué)組分
        1.3.2 雷公藤生物堿殺蟲活性
        1.3.3 雷公藤生物堿殺蟲作用機(jī)理研究進(jìn)展
    1.4 RNA干擾技術(shù)及應(yīng)用
        1.4.1 RNA干擾的本質(zhì)
        1.4.2 RNAi應(yīng)用及方法
    1.5 選題目的及意義
第二章 粘蟲兩種目的基因克隆及序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 試驗(yàn)方法
        2.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 粘蟲IP₃R基因克隆及序列分析
        2.2.2 粘蟲PMCA基因克隆及序列分析
    2.3 討論
        2.3.1 IP₃R在昆蟲間具有高度同源性
        2.3.2 PMCA在昆蟲間具有高度同源性
    2.4 小結(jié)
第三章 粘蟲中兩種基因mRNA的表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試?yán)ハx
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 粘蟲不同發(fā)育階段IP₃R基因的表達(dá)分析
        3.2.2 粘蟲不同組織中IP₃R基因的表達(dá)分析
        3.2.3 粘蟲不同發(fā)育階段PMCA基因的表達(dá)分析
        3.2.4 粘蟲不同組織中PMCA基因的表達(dá)分析
    3.3 討論
        3.3.1 IP₃R在不同物種中表達(dá)分布的差異性與功能相關(guān)
        3.3.2 PMCA在不同物種內(nèi)時(shí)空表達(dá)的差異性與功能相關(guān)
    3.4 小結(jié)
第四章 RNAi處理試蟲對雷公藤次堿敏感性的變化
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試?yán)ハx
        4.1.2 試劑與儀器
        4.1.3 試驗(yàn)方法
        4.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 粘蟲IP₃R基因在雷公藤次堿殺蟲作用中的功能鑒定
        4.2.2 粘蟲PMCA基因在雷公藤次堿殺蟲作用中的功能鑒定
    4.3 討論
        4.3.1 雷公藤次堿對IP3R無明顯影響
        4.3.2 雷公藤次堿可作用于PMCA
    4.4 小結(jié)
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 IP₃R不是雷公藤次堿的殺蟲靶標(biāo)
        5.1.2 PMCA可能是雷公藤次堿的分子靶標(biāo)
    5.2 主要結(jié)論
    5.3 本研究創(chuàng)新點(diǎn)
    5.4 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄A 粘蟲IP₃R基因開放閱讀框序列
    附錄B 粘蟲IP₃R氨基酸序列
    附錄C 粘蟲IP₃R氨基酸多重序列比較
    附錄D 粘蟲PMCA基因開放閱讀框序列
    附錄E 粘蟲PMCA氨基酸序列
    附錄F 粘蟲PMCA氨基酸多重序列比較
致謝
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本文編號(hào)：3846070