產酶溶桿菌屬黃單胞科,溶桿菌屬,是一種在環(huán)境中廣泛存在的新型植物病害生防細菌。而HSAF(Heat-Stable Antifungal Factor)是其產生的一種小分子抗菌物質,其能夠對多種真菌和卵菌產生抑制作用,在生物防治中發(fā)揮著重要作用,是一種結構和作用方式全新的廣譜抗真菌、卵菌活性物質。生產無農藥殘留、無病蟲危害的農業(yè)產品一直是促進人類自身健康和保護生態(tài)環(huán)境的重要途徑,也是生物防治藥物研究領域的主要目標。而HSAF作為一種環(huán)境友好型殺菌劑,具有開發(fā)為新型生物源農藥的巨大潛力。然而現(xiàn)階段HSAF的產量太低,無法實現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產,一定程度上制約了其在病害防治中的廣泛應用和推廣。因此獲得HSAF高產菌株,提高HSAF產量是當前亟需解決的問題。本研究以HSAF為研究對象,以產酶溶桿菌OH11為出發(fā)菌株,采用三種方法進行HSAF高產菌株的選育。通過紫外誘變、HSAF負調控基因的敲除、HSAF生物合成基因及其正調控基因的啟動子改造,構建了多個不同的突變菌株,并對其HSAF產量進行評估。通過紫外誘變,篩選到3株HSAF高產菌株,其HSAF產量與野生型相比分別提高了 36%、33%和25%...

【文章頁數】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 產酶溶桿菌研究進展
        1.1.1 產酶溶桿菌的分類
        1.1.2 產酶溶桿菌的生物學特征
        1.1.3 產酶溶桿菌的生防作用
        1.1.4 胞外水解酶
        1.1.5 WAP-8294A
        1.1.6 熱穩(wěn)定抗真菌因子HSAF
        1.1.7 HSAF生物合成的遺傳調控
    1.2 微生物高產菌株選育策略
        1.2.1 誘變育種
        1.2.2 核糖體工程
        1.2.3 代謝工程
        1.2.4 基因組改組技術
    1.3 本研究的目的意義與主要研究內容
        1.3.1 本研究的目的與意義
        1.3.2 主要研究內容
第2章 紫外誘變選育HSAF高產菌株
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 實驗方法
    2.3 結果與分析
        2.3.1 生長曲線的測定
        2.3.2 致死率曲線的測定
        2.3.3 HSAF高產菌株的篩選
        2.3.4 遺傳穩(wěn)定性實驗
    2.4 小結與討論
第3章 敲除負調控基因選育HSAF高產菌株
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 實驗方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 三個HSAF負調控基因的調控作用驗證
        3.3.2 雙突變菌株敲除突變體的構建
        3.3.3 雙突變菌株的HSAF產量評估
        3.3.4 三突變菌株敲除突變體的構建
        3.3.5 三突變菌株的HSAF產量評估
    3.4 小結與討論
第4章 HSAF合成基因及其正調控基因的啟動子改造選育HSAF高產菌株
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 實驗方法
    4.3 結果與分析
        4.3.1 將強啟動子插入HSAF合成基因啟動子之前
        4.3.2 用強啟動子替換HSAF合成基因啟動子
        4.3.3 用強啟動子替換HSAF正調控基因啟動子
    4.4 小結與討論
第5章 結論與展望
    5.1 主要結論
    5.2 展望
參考文獻
在讀期間發(fā)表的學術論文及研究成果
致謝



本文編號：3780986