腫瘤是引起人類死亡率持續(xù)攀升的元兇之一,腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移主要憑借腫瘤血管來(lái)供應(yīng)必要的氧氣與營(yíng)養(yǎng),血管缺乏的腫瘤具有自限性生長(zhǎng)的特點(diǎn)。如今,眾多的抗血管藥物已被開(kāi)發(fā)出來(lái)用于阻斷外界營(yíng)養(yǎng)供給實(shí)現(xiàn)腫瘤饑餓治療,但此藥物發(fā)揮效用后,腫瘤細(xì)胞會(huì)通過(guò)自噬增強(qiáng)效應(yīng)為自身增殖提供內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),從而進(jìn)行自我保護(hù)導(dǎo)致抗腫瘤效果嚴(yán)重下降。破壞腫瘤血管系統(tǒng)的同時(shí)抑制增強(qiáng)的自噬,對(duì)腫瘤的外源性與內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)來(lái)源進(jìn)行雙重阻斷,將會(huì)是一種有前途的抗腫瘤方法。因此,本課題以海藻酸鈉（Sodium alginate,Alg）為基質(zhì)材料,Fe3+為交聯(lián)劑與門控開(kāi)關(guān),康普瑞�。–ombretastatin A4,CA4）及硫酸羥基氯喹（Hydroxychloroquine,HCQ）為治療藥物,構(gòu)建了一種具有定位重塑功能的智能納米凝膠CA4-FeAlg/HCQ,用于共遞送血管阻斷劑CA4與自噬抑制劑HCQ,實(shí)現(xiàn)CA4在腫瘤血管和HCQ在腫瘤細(xì)胞中的貫序釋放,以及對(duì)A549非小細(xì)胞肺癌的協(xié)同治療。本課題首先將血管阻斷劑CA4接枝到Alg上,合成接枝率為14%的Alg-CA4偶聯(lián)物,提高CA4的生物利用度與穩(wěn)定性。然后與Fe3+... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞
第一章 前言
第二章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的合成及表征
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 Alg-CA4偶聯(lián)物的合成
        2.2 Alg-CA4偶聯(lián)物的表征
            2.2.1 紫外-可見(jiàn)光(UV-Vis )全波長(zhǎng)掃描
            2.2.2 傅立葉變換紅外光譜(FT IR)表征
            2.2.3 核磁共振氫譜(~1H NMR)檢測(cè)
            2.2.4 Zeta電位的考察
        2.3 Alg-CA4接枝率的考察
            2.3.1 CA4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.3.2 接枝率的測(cè)定
        2.4 CA4-FeAlg的制備與表征
            2.4.1 CA4-FeAlg的制備
            2.4.2 透射電鏡(TEM)表征
            2.4.3 CA4-FeAlg在模擬TME下的粒徑轉(zhuǎn)化研究
        2.5 HCQ含量測(cè)定方法的建立
            2.5.1 HCQ的紫外-可見(jiàn)光(UV-Vis)全波長(zhǎng)掃描
            2.5.2 HCQ標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.6 CA4-FeAlg/HCQ的制備與表征
            2.6.1 CA4-FeAlg載藥能力的考察
            2.6.2 CA4-FeAlg/HCQ的制備
            2.6.3 粒徑分布及電位的考察
            2.6.4 分散性考察
        2.7 CA4-FeAlg/HCQ的體外釋藥實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 Alg-CA4偶聯(lián)物的表征
            3.1.1 UV-Vis全波長(zhǎng)掃描分析
            3.1.2 FT-IR表征結(jié)果
            3.1.3 ~1H NMR檢測(cè)
            3.1.4 Zeta電位的考察
        3.2 Alg-CA4接枝率的確定
        3.3 CA4-FeAlg的制備與表征
            3.3.1 TEM表征
            3.3.2 CA4-FeAlg在模擬TME下的粒徑轉(zhuǎn)化研究
        3.4 HCQ含量測(cè)定方法的建立
            3.4.1 HCQ的紫外-可見(jiàn)光全波長(zhǎng)掃描
            3.4.2 HCQ標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.5 CA4-FeAlg/HCQ的制備與表征
            3.5.1 CA4-FeAlg載藥能力的考察
            3.5.2 粒徑分布及電位的考察
            3.5.3 分散性考察
        3.6 體外釋藥實(shí)驗(yàn)
    4 本章小結(jié)
第三章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器與設(shè)備
        1.2 試劑
        1.3 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.1.3 細(xì)胞的凍存
        2.2 A549細(xì)胞對(duì)納米凝膠的攝取行為考察
        2.3 溶酶體共定位的研究
        2.4 體外·OH的測(cè)定
        2.5 A549細(xì)胞內(nèi)H_2O_2水平的檢測(cè)
        2.6 A549細(xì)胞內(nèi)pH值的檢測(cè)
        2.7 溶酶體的損傷研究
        2.8 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            2.8.1 免疫組化方法
            2.8.2 ELISA試劑盒考察自噬水平變化
        2.9 體外三維多細(xì)胞球檢測(cè)腫瘤深部滲透
            2.9.1 體外三維多細(xì)胞球模型的建立
            2.9.2 腫瘤深部滲透實(shí)驗(yàn)
        2.10 SRB法測(cè)定CA4-FeAlg/HCQ對(duì)A549細(xì)胞的毒性行為
            2.10.1 SRB法
            2.10.2 A549細(xì)胞的抑制率實(shí)驗(yàn)
        2.11 Calcein-AM/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞活性
    3 結(jié)果與討論
        3.1 A549細(xì)胞對(duì)納米凝膠的攝取行為考察
        3.2 溶酶體共定位的研究
        3.3 體外·OH的測(cè)定
        3.4 A549細(xì)胞內(nèi)H_2O_2水平的檢測(cè)
        3.5 A549細(xì)胞內(nèi)pH值的檢測(cè)
        3.6 溶酶體的損傷研究
        3.7 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            3.7.1 免疫組化方法
            3.7.2 ELISA試劑盒考察自噬水平變化
        3.8 體外三維多細(xì)胞球檢測(cè)腫瘤深部滲透
        3.9 SRB法測(cè)定CA4-FeAlg/HCQ對(duì)A549細(xì)胞的毒性行為
        3.10 Calcein-AM/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞活性
    4 本章小結(jié)
第四章 CA4-FeAlg/HCQ納米凝膠的體內(nèi)活性研究
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動(dòng)物模型
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 A549荷瘤裸鼠模型的建立
        2.2 體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
        2.3 免疫熒光染色觀察體內(nèi)腫瘤深部滲透性能
        2.4 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
            2.4.1 實(shí)驗(yàn)分組與操作步驟
            2.4.2 H&E染色法檢測(cè)組織病理變化
        2.5 腫瘤血管密度的考察
        2.6 冰凍切片檢測(cè)腫瘤部位的ROS水平
        2.7 腫瘤部位的自噬水平研究
    3 結(jié)果與討論
        3.1 體內(nèi)分布結(jié)果
        3.2 體內(nèi)腫瘤深部滲透性能的分析
        3.3 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
            3.3.1 治療期間裸鼠腫瘤體積與體重的變化
            3.3.2 H&E染色法檢測(cè)組織病理變化
        3.4 腫瘤血管密度的考察
        3.5 腫瘤部位的ROS水平
        3.6 腫瘤部位的自噬水平研究
    4 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]卵巢惡性腫瘤化療研究進(jìn)展[J]. 牛星燕,張冬萍,李飛霞,彭蕓花.  國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2020(02)
[2]常規(guī)蘇木精-伊紅HE染色與環(huán)保試劑HE染色的效果對(duì)比[J]. 鄭建華,金玉蘭,鄒澤陽(yáng).  中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備. 2019(04)
[3]4種細(xì)胞毒活性方法評(píng)價(jià)紫草素體外腫瘤細(xì)胞抑制作用效果[J]. 柴冰陽(yáng),陳澤慧,張閃閃,應(yīng)雪,張波.  中草藥. 2019(01)
[4]病理技術(shù)HE染色在病理診斷中的應(yīng)用效果觀察[J]. 和月生.  中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用. 2018(07)
[5]基于腫瘤微環(huán)境響應(yīng)的納米凝膠載藥系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 尚星星,葉孟原,彭晏,蔡萌,祝紅達(dá).  醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2016(11)
[6]Earle’s鹽平衡液饑餓誘導(dǎo)DLD-1,HCT-116,A2780,CHO,Hep G2和SMMC7721腫瘤細(xì)胞系自噬發(fā)生的時(shí)間優(yōu)化（英文）[J]. 張文亮,張明明,劉斌,石宏順,王海河.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(04)
[7]海藻酸鈉的特性及其在食品中的應(yīng)用[J]. 詹現(xiàn)璞,吳廣輝.  食品工程. 2011(01)

博士論文
[1]葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)及腫瘤微環(huán)境響應(yīng)新型靶向遞藥系統(tǒng)的研究[D]. 馬鵬凱.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]狗棗獼猴桃多酚的抗氧化與抗腫瘤效應(yīng)研究[D]. 左麗麗.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2013
[3]小分子藥物與牛血清白蛋白相互作用研究[D]. 徐洪亮.吉林大學(xué) 2013
[4]聚磷酸酯納米凝膠作為抗癌藥物輸送載體的研究[D]. 吳卷.中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]共附生微生物抗腫瘤活性菌的篩選、鑒定及活性產(chǎn)物的研究[D]. 馬君千.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[2]抑制自噬與抗血管聯(lián)合治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李丁.第二軍醫(yī)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3636921