隨著產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引起的食物中毒數(shù)量的增加,以及耐藥性細(xì)菌的大量出現(xiàn),研發(fā)新型的、安全的防腐劑是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。產(chǎn)腸毒素大腸桿菌耐熱腸毒素(st)和不耐熱腸毒素(lt)是主要的致病因子。含硫化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗微生物的作用而被廣泛關(guān)注。本文選取異硫氰酸芐酯(BITC)、二烯丙基二硫醚(DADS)和異硫氰酸苯乙酯(PEITC)三種外源化合物,探究其對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌抑菌活性影響,通過(guò)RT-PCR方法,探究亞抑制濃度下異硫氰酸芐酯、二烯丙基二硫醚和異硫氰酸苯乙酯對(duì)毒力因子表達(dá)、信號(hào)分子AI-2相對(duì)活性以及群體感應(yīng)基因表達(dá)的影響。為了探究異硫氰酸芐酯、二烯丙基二硫醚和異硫氰酸苯乙酯對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌致病機(jī)理的影響,根據(jù)ATP試劑盒測(cè)定其對(duì)菌體細(xì)胞總ATP和胞外ATP的影響,通過(guò)掃描電鏡觀察對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌體形態(tài)影響。結(jié)果表明:異硫氰酸芐酯、二烯丙基二硫醚和異硫氰酸苯乙酯最小抑菌濃度分別為160μmol/L,2mmol/L和400μmol/L。異硫氰酸芐酯、二烯丙基二硫醚和異硫氰酸苯乙酯均能下調(diào)毒力因子的表達(dá),且呈一定的濃度依賴性。此外,異硫氰酸芐酯和二烯丙基二硫醚可以抑制產(chǎn)腸毒素大桿菌信號(hào)分子AI-2相對(duì)活性的表達(dá),且呈一定的濃度依賴性。異硫氰酸芐酯和二烯丙基二硫醚可以下調(diào)群體感應(yīng)基因LuxS和SdiA的表達(dá)。細(xì)胞總ATP含量降低,細(xì)胞外ATP的含量增加。通過(guò)掃描電鏡觀察異硫氰酸芐酯和異硫氰酸苯乙酯可以引起細(xì)胞表面皺縮,塌陷,甚至發(fā)生破裂,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物外泄。含硫化合物不僅能抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌毒力基因,信號(hào)分子和群體感應(yīng)基因表達(dá),而且對(duì)菌體的形態(tài)學(xué)也會(huì)產(chǎn)生影響。說(shuō)明含硫化合物具有作為新型的食品防腐劑抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的潛在應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：大連工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TS264.3
【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 含硫化合物
        1.1.1 含硫化合物的發(fā)展趨勢(shì)
        1.1.2 含硫化合物來(lái)源
        1.1.3 含硫化合物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.1.4 含硫化合物主要種類
            1.1.4.1 異硫氰酸芐酯（BITC）
            1.1.4.2 二烯丙基二硫醚（DADS）
            1.1.4.3 異硫氰酸苯乙酯（PEITC）
    1.2 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ENTEROTOXIGENICESCHERICHIACOLIETEC）概述
        1.2.1 生物學(xué)特性
        1.2.2 致病機(jī)理
            1.2.2.1 不耐熱腸毒素（heat-labileenterotoxin,LT）
            1.2.2.2 耐熱腸毒素（Heat-stableenterotoxin,ST）
            1.2.2.3 定值因子
            1.2.2.4 鞭毛
        1.2.3 外源物質(zhì)對(duì)致病性產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的抑制作用
            1.2.3.1 海洋微生物溶菌酶
            1.2.3.2 乳酸鏈球菌素
            1.2.3.3 二氫楊梅素
            1.2.3.4 中草藥
    1.3 群體感應(yīng)概述
        1.3.1 LuxS/AI-2型感應(yīng)系統(tǒng)
        1.3.2 SdiA
    1.4 研究的目的及意義
第二章 含硫化合物的抑菌活性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 試劑及藥品
        2.1.5 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 供試菌的活化
        2.2.2 樣品處理
        2.2.3 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定
        2.2.4 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 BITC對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌最小抑制濃度測(cè)定結(jié)果
        2.3.2 PEITC對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌最低抑制濃度測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 DADS對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌最小抑制濃度測(cè)定結(jié)果
        2.3.4 BITC對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌生長(zhǎng)的影響
        2.3.5 PEITC對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的影響
        2.3.6 DADS對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌生長(zhǎng)的影響
        2.3.7 討論
    2.4 本章小結(jié)
第三章 含硫化合物對(duì)菌體毒力基因表達(dá)的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品
        3.1.3 培養(yǎng)基的配置
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑與藥品
        3.1.5 儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 菌株活化
        3.2.2 樣品制備
        3.2.3 細(xì)菌總RNA提取與檢測(cè)
        3.2.4 除雜與cDNA合成
        3.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.2.5.1 引物特異性驗(yàn)證
            3.2.5.2 含硫化合物對(duì)ETEC的毒力基因（st、lt）表達(dá)的影響
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 RNA的提取與檢測(cè)
        3.3.2 引物特異性檢測(cè)
        3.3.3 含硫化合物對(duì)ETEC毒力基因表達(dá)的影響
            3.3.3.1 BITC對(duì)耐熱毒素和不耐熱毒素表達(dá)的影響
            3.3.3.2 DADS對(duì)耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素表達(dá)的影響
            3.3.3.3 PEITC對(duì)耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素表達(dá)的影響
        3.3.4 討論
    3.4 本章小結(jié)
第四章 含硫化合物對(duì)菌體群體感應(yīng)基因表達(dá)的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品
        4.1.3 培養(yǎng)基的配置
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑與藥品
        4.1.5 儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 菌株活化
        4.2.2 樣品制備
        4.2.3 含硫化合物對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌群體感應(yīng)信號(hào)分子的影響
        4.2.4 含硫化合物對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌群體感應(yīng)基因表達(dá)的影響
        4.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 含硫化合物對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌信號(hào)分子表達(dá)的影響
            4.3.1.1 BITC對(duì)信號(hào)分子AI-2相對(duì)活性表達(dá)的影響
            4.3.1.2 DADS對(duì)信號(hào)分子AI-2相對(duì)活性表達(dá)的影響
        4.3.2 含硫化合物對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌群體感應(yīng)基因的影響
            4.3.2.1 BITC對(duì)LuxS和SdiA表達(dá)的影響
            4.3.2.2 DADS對(duì)LuxS和SdiA表達(dá)的影響
        4.3.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
第五章 含硫化合物對(duì)菌體生物特性的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品
        5.1.3 試劑與藥品
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 菌株活化
        5.2.2 樣品處理
        5.2.3 總ATP和胞外ATP的測(cè)定
            5.2.3.1 總ATP的測(cè)定
            5.2.3.2 胞外ATP測(cè)定
        5.2.4 掃描電鏡（SEM）
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 總ATP和胞外ATP測(cè)定
        5.3.2 含硫化合物對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌體形態(tài)的影響
        5.3.3 討論
    5.4 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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