【摘要】：低共熔溶劑(DESs)是由氫鍵受體與氫鍵供體以一定化學(xué)計(jì)量比通過(guò)氫鍵形成的均一穩(wěn)定體系,由于其具有基本無(wú)毒、合成簡(jiǎn)單、易于儲(chǔ)存、原料利用率高且來(lái)源豐富、價(jià)格低廉、可生物降解等優(yōu)勢(shì),低共熔溶劑在藥用植物有效成分的提取和分離中備受關(guān)注。超高壓提取技術(shù)(UPE)是在常溫高壓下操作,利用高壓對(duì)溶劑及細(xì)胞結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的影響對(duì)有效成分進(jìn)行提取,同時(shí)保證有效成分不會(huì)發(fā)生損失,而且提取時(shí)間短,提取得率高、無(wú)污染、雜質(zhì)成分少,是近年來(lái)一種新型環(huán)保的提取技術(shù)。基于低共熔溶劑和超高壓提取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),本論文選擇黃芩藥材和其主要化學(xué)成分黃芩苷和黃芩素作為研究對(duì)象,以低共熔溶劑為提取溶劑,輔助超高壓和微波提取技術(shù),對(duì)黃芩苷的提取效果進(jìn)行了研究;建立了一種超高壓輔助低共熔溶劑制備雙黃連復(fù)方中藥制劑的方法,并對(duì)其毒性進(jìn)行了初步研究;研究了在低共熔體系中,酶水解黃芩苷制備黃芩素的工藝條件。本論文主要開(kāi)展了以下工作:(1)合成了9種疏水性季銨鹽類低共熔溶劑,探討了微波輔助低共熔溶劑對(duì)黃芩苷的提取效果。首先篩選出微波輔助提取黃芩苷時(shí)最優(yōu)的低共熔溶劑;通過(guò)單因素和響應(yīng)面設(shè)計(jì)法考察了低共熔溶劑的種類、含水量以及微波輔助提取溫度、液固比、提取時(shí)間等對(duì)黃芩苷提取率的影響,確定最佳的提取參數(shù)為:含水量為33%的癸酸:四丁基氯化銨(摩爾比1:2)作為提取溶劑,反應(yīng)溫度85℃,提取時(shí)間10 min,液固比為22.74 mL/g。在該條件下,黃芩苷的平均提取率達(dá)到106.96 mg/g,比傳統(tǒng)有機(jī)溶劑的提取效率更優(yōu)。(2)應(yīng)用5種親水性氯化膽堿類低共熔溶劑超高壓輔助提取(DESs-UPE)黃芩中黃芩苷。以黃芩苷的提取率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),從中篩選出超高壓輔助提取黃芩苷時(shí)最優(yōu)的溶劑,并采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)法對(duì)提取溶劑的濃度、提取壓力、提取時(shí)間、固液比等因素進(jìn)行了優(yōu)化,確定了最佳的提取參數(shù)。最終選定的低共溶溶劑為氯化膽堿-乳酸(ChCl-LA),摩爾比1:1,含水量為40%,提取壓力為400 MPa,反應(yīng)時(shí)間為4 min,液固比為110 mL/g,在上述優(yōu)化條件下進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn),黃芩苷的平均提取率達(dá)到了116.8 mg/g,DESs-UPE對(duì)黃芩苷的提取效果優(yōu)于微波和熱回流等其他提取方法。(3)以ChCl-LA(1:1)為溶劑,超高壓輔助提取制備雙黃連復(fù)方中藥制劑�；贑hCl-LA(1:1)對(duì)黃芩苷的良好提取效率,進(jìn)一步利用正交試驗(yàn)法,以黃芩苷、連翹苷、綠原酸提取率為含量測(cè)定指標(biāo),優(yōu)化了ChCl-LA(1:1)為溶劑,超高壓輔助提取、制備雙黃連制劑(處方組成:連翹、黃芩和金銀花)的制備條件。最佳的制備參數(shù)為:ChCl-LA(1:1)的含水量為30%,提取壓力為400 MPa,提取時(shí)間為4 min,固液比為1:8。在上述條件下制備,綠原酸提取率為29.77 mg/g,黃芩苷提取率為112.66mg/g,連翹苷提取率為5.99 mg/g。(4)初步研究了ChCl-LA(1:1)的急性毒性,并且對(duì)雙黃連復(fù)方中藥制劑進(jìn)行了初步的急毒評(píng)價(jià)。采用小鼠灌胃給藥方式,用ChCl-LA(1:1)作為供試液,按寇氏法進(jìn)行半數(shù)致死劑量(LD_(50))的測(cè)定;并且用該雙黃連低共熔復(fù)方中藥制劑作為供試品,按半數(shù)致死量的1/5組、半數(shù)致死量的1/10組給藥,測(cè)定該制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重增長(zhǎng)、臟器系數(shù)以及反映肝腎功能的主要生化指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示,ChCl-LA(1:1)的LD_(50)=3538 mg/kg,95%置信區(qū)間3254 mg/kg~3855 mg/kg,這表明ChCl-LA(1:1)屬于低毒物質(zhì)。用此復(fù)方雙黃連口服制劑短期給藥后對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重增長(zhǎng)、臟器系數(shù)以及反映肝腎功能的主要生化指標(biāo)均未見(jiàn)有明顯的影響。(5)用氯化膽堿類的低共熔溶劑作為溶劑,研究黃芩自生酶催化水解黃芩苷制備黃芩素的最佳條件。以黃芩苷的水解率為指標(biāo),篩選出水解黃芩苷最優(yōu)的溶劑;采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),考察了溫度、底物濃度和加酶量等因素對(duì)黃芩苷水解率的影響,并且對(duì)最優(yōu)酶解條件進(jìn)行優(yōu)化;結(jié)果表明,在試驗(yàn)考察范圍內(nèi),以黃芩苷為水解底物,選擇了含水量80%的氯化膽堿:尿素(1:1)的低共熔溶劑作為水解黃芩苷的溶劑,確定最優(yōu)水解條件為:每毫升反應(yīng)體系中加入黃芩自身酶160μL,反應(yīng)溫度為50℃,黃芩苷濃度為0.2 mg/mL,在此條件下水解,黃芩苷水解率為92.3%,黃芩素的純度為82.8%。
【圖文】：

不同低共熔溶劑的提取效果

微波提取單因素試驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TQ461

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2708582