【摘要】：雞蛋含有豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白,是嬰幼兒早期的膳食蛋白主要來源,然而蛋清中有多種過敏原,誘導(dǎo)嬰幼兒食物過敏,嚴(yán)重影響過敏患兒的生活質(zhì)量。卵白蛋白(OVA)作為蛋清中含量最多的蛋白質(zhì),是引起雞蛋過敏的關(guān)鍵過敏原�？诜褪苁侵缚诜䶮o害抗原(如食物蛋白)而引起機(jī)體產(chǎn)生局部或全身免疫無反應(yīng)狀態(tài)。文獻(xiàn)表明,口服耐受建立失敗,會發(fā)生食物過敏反應(yīng),如何成功建立口服耐受是防治食物過敏的主要途徑。柑橘屬植物果皮含有黃酮類化合物等多種生物活性物質(zhì),但常作為廢棄物被浪費(fèi)。蕓香柚皮苷是果皮中含有的主要的黃酮類化合物,具有抗氧化、抗癌、抗病毒和抗炎等方面的生物活性,但其對口服耐受的影響尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對蕓香柚皮苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,采用OVA誘導(dǎo)BALB/C小鼠口服耐受模型考察其對口服耐受的影響。具體研究內(nèi)容如下:1.蕓香柚皮苷提取工藝優(yōu)化,采用酶解輔助乙醇回流法提取(以本課題組前期建立的提取工藝為基礎(chǔ)),乙醇提取條件:8倍量的60%乙醇回流提取3次,每次時間分別為1.5、1.0和0.5 h;酶解輔助條件:通過考察酶的種類及濃度、酶解溫度、酶解時間和酶解pH對蕓香柚皮苷提取率的影響,獲得最優(yōu)單因素,分別是0.2 mg/mL果膠酶、45℃、120 min和pH 4.5,蕓香柚皮苷的提取率達(dá)到5.31 mg/g,在此基礎(chǔ)上,采用L_9(3~4)正交實(shí)驗(yàn),最終確定最佳提取工藝:0.3 mg/mL果膠酶、45℃、120 min和pH 5.0,蕓香柚皮苷的提取率達(dá)到5.83 mg/g。2.蕓香柚皮苷對口服耐受的影響,建立OVA誘導(dǎo)BALB/c小鼠口服耐受模型,利用小鼠體重、體溫、糞便評分、血清中抗體水平和腸道內(nèi)容物中IgA水平,以及結(jié)腸組織中的GATA3、Foxp3、STAT5、MHCⅡ、CXCR1和CCR7的蛋白表達(dá)情況,考察蕓香柚皮苷對OVA口服耐受的影響。結(jié)果表明,與致敏模型組相比,口服耐受組和蕓香柚皮苷聯(lián)合作用耐受組能夠抑制由過敏導(dǎo)致的小鼠體溫降低;減輕其腹瀉癥狀;使血清中OVA特異性IgE、IgA和IgG1水平降低;血清MCP-1水平升高;腸道內(nèi)容物OVA特異性IgA水平降低;小鼠結(jié)腸組織GATA3、MHCⅡ、CXCR1和CCR7表達(dá)水平降低及Foxp3和STAT5表達(dá)水平升高。由上述可知,與口服耐受組相比,不同濃度的蕓香柚皮苷耐受組可以更好的促進(jìn)口服耐受的形成。
【圖文】：

圖 2.1 蕓香柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜分析圖Figure 2.1 High performance liquid Chromatography of narirutin standard2.3.4 線性關(guān)系取標(biāo)準(zhǔn)品儲備液 0.50 mL，依次稀釋成 0.50、0.25、0.125、0.0625 和 0.0312mg/mL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖 2.2，得到蕓香柚皮苷濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=2.55×107x+1.02×106，相關(guān)系數(shù) R2為 0.9916，在 0.03125 -0.5 mg/mL 相關(guān)性良好。y = 2.55x107x+ 1.02x106R2= 0.9916800000010000000120000001400000016000000積（mAUs）蕓香柚皮苷

第三章 蕓香柚皮苷對 OVA 口服免疫耐受的影響（5）30 mg/kg 蕓香柚皮苷耐受組（以下簡稱 30 mg/kg 耐受組）：第 0 天至第 4 天通過灌胃的方式給予 1 mg/只的 OVA 和 30 mg/kg 的蕓香柚皮苷，致敏方式和激發(fā)方式均同致敏模型組。（6）50 mg/kg 蕓香柚皮苷耐受組（以下簡稱 50 mg/kg 耐受組）：第 0 天至第 4 天通過灌胃的方式給予 1 mg/只的 OVA 和 50 mg/kg 的蕓香柚皮苷，致敏方式和激發(fā)方式均同致敏模型組。每次激發(fā)后 1h 后對小鼠進(jìn)行腹瀉評分及體溫測量。1μgOVA/Alum(i.P.)30mgOVAorPBS(P.O.)1mgOVAorPBS(P.O.)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ460.6

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本文編號：2695186