植物病害問(wèn)題是影響農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)的一大難題。番茄作為世界上栽培最為普遍的果蔬之一,受病害影響也相當(dāng)嚴(yán)重。傳統(tǒng)防治措施如改善栽培措施對(duì)防治病害的能力是有限的。而化學(xué)防治帶來(lái)環(huán)境污染問(wèn)題,藥物殘留對(duì)人類(lèi)健康也造成了潛在威脅。因此,通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段獲得抗病能力強(qiáng)的番茄新品種,可以克服傳統(tǒng)育種周期長(zhǎng),物種隔離等問(wèn)題,為番茄選育及種質(zhì)資源的優(yōu)化開(kāi)辟了新道路。NP24作為病程相關(guān)蛋白PR5家族中的一員,其生物學(xué)功能、植物抗病性分子機(jī)制、抗病防衛(wèi)基因調(diào)控的研究較多,尤其是它們與植物抗病性的關(guān)系引起了強(qiáng)烈關(guān)注。因此對(duì)該基因的克隆和功能驗(yàn)證將對(duì)番茄選育具有重要價(jià)值。本研究中以野生型番茄為材料,克隆了NP24基因,分析了它的組織表達(dá)模式,并利用生物學(xué)軟件分析及預(yù)測(cè)了它的生物學(xué)功能及進(jìn)化關(guān)系。同時(shí),構(gòu)建了該基因的超表達(dá)載體和干擾載體,通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化分別獲得了超表達(dá)和干擾的轉(zhuǎn)基因株系。同時(shí),首次體外真核表達(dá)純化出有活性的NP24蛋白,進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了該蛋白對(duì)植物病原菌的抗性關(guān)系。本研究主要獲得以下成果:(1)成功克隆NP24。NP24含有718個(gè)核苷酸的開(kāi)放閱讀框,編碼247個(gè)氨基酸,屬于PR5蛋白家族的類(lèi)...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1NP24全長(zhǎng)片段的PCR擴(kuò)增847bpFig2.1PCRAmplificationofNP24geneM：Trans2KMarker

植株的鑒定均參考2.2RNA并反轉(zhuǎn)錄合成cD達(dá)量變化。分析長(zhǎng)同樣大小的T2超表境為：光照16h，黑暗晚溫度設(shè)置在18±2℃。與野生型植株出現(xiàn)失水物信息學(xué)分析片段全長(zhǎng)847bp，包含

圖2.2NP24蛋白信號(hào)肽剪切位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果

碩士學(xué)位論文2NP24的克隆通過(guò)ORFFinder在線(xiàn)軟件對(duì)NP24基因全長(zhǎng)序列的開(kāi)放閱讀框有741個(gè)核苷酸并編碼由247個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的蛋白。NP24蛋白理化性質(zhì)ProtParam預(yù)測(cè)軟件顯示NP24是26kD分子量的蛋白，等電點(diǎn)，含有較....

圖2.3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

圖2.3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.2.3PredictionoftransmembranestructureofNP24P24進(jìn)化樹(shù)分析過(guò)NP24的蛋白序列進(jìn)行比對(duì)找到與其同源的基因，通過(guò)ClustalXMEGA5.1NJ法建立系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示該基因與....

圖2.4NP24系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

圖2.3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.2.3PredictionoftransmembranestructureofNP242.3.2NP24進(jìn)化樹(shù)分析通過(guò)NP24的蛋白序列進(jìn)行比對(duì)找到與其同源的基因，通過(guò)ClustalX比對(duì)序列，用MEGA5.1NJ....

本文編號(hào)：4038967