為培育具有藥用保健作用的胡蘿卜品種提供參考,以黑田五寸胡蘿卜為材料,克隆胡蘿卜DcBMT基因,并分析其進(jìn)化和表達(dá)情況。結(jié)果表明:克隆得到的胡蘿卜DcBMT基因,其ORF框長為1 080bp,可編碼359個氨基酸,該蛋白酶分子質(zhì)量為39.25kD,等電點pI為6.31,含有5個保守的Box結(jié)構(gòu)和3個保守基序。胡蘿卜和白芷的BMT氨基酸序列屬同一分枝,而與其他傘形科植物存在一定距離。胡蘿卜DcBMT基因在根發(fā)育3d和60d的表達(dá)量最高,在收獲時(90d)表達(dá)量最低。DcBMT基因在胡蘿卜肉質(zhì)根發(fā)育過程中均有表達(dá),胡蘿卜肉質(zhì)根中可能有佛手酚及佛手柑內(nèi)脂合成及物質(zhì)的積累。

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【部分圖文】：

圖1胡蘿卜DcBMT基因的克隆

從圖1看出，加cDNA模板的黑田五寸均克隆得到1條約1000bp的基因片段，測序獲得的序列及其長度均一致，片段長度均為1080bp,ORF框長度均為1080bp。獲得的該基因ORF框與公布的XM＿017394940.1和XM＿017397150.1基因序列ORF具有高度一致....

圖2黑田五寸克隆的DcBMT基因與公布的DcBMT核苷酸序列比對

圖1胡蘿卜DcBMT基因的克隆2.2胡蘿卜DcBMT基因編碼的氨基酸序列

圖3黑田五寸DcBMT基因推導(dǎo)的氨基酸序列與公布的胡蘿卜和前胡BMT氨基酸比對

從圖3看出，克隆到的胡蘿卜DcBMT基因推導(dǎo)的氨基酸序列與2個公布的胡蘿卜BMT氨基酸及前胡BMT氨基酸結(jié)構(gòu)一致，均含有5個保守Box結(jié)構(gòu)域，3個保守基序。ZHAO等[6]研究表明，前胡BMT5個保守Box結(jié)構(gòu)域均參與SAM結(jié)合，1個Box(BoxⅣ）與底物結(jié)合，3個基序結(jié)構(gòu)為催....

圖4胡蘿卜與其他物種BMT氨基酸的進(jìn)化比較

從圖4可知，所有傘形科物種均在同一個大分枝上，而非傘形科植物藍(lán)星睡蓮屬于單獨的分枝；胡蘿卜DcBMT與白芷BMT進(jìn)化最接近，為同一分枝；前胡和珊瑚菜、阿米芹與歐芹和芹菜處在同一分枝。白芷為中國傳統(tǒng)藥物之一，其對應(yīng)的BMT蛋白具有催化佛手酚轉(zhuǎn)化成佛手柑內(nèi)酯功能[15]，前胡、珊瑚菜....

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