增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在分裂旺盛的細(xì)胞內(nèi)具有很強(qiáng)的活躍性,主要參與細(xì)胞周期調(diào)控、DNA的復(fù)制、DNA損傷修復(fù)及表觀遺傳修飾。經(jīng)差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),PCNA的含量與柱頭發(fā)育成負(fù)相關(guān),在柱頭發(fā)育的早期表達(dá)量較高,隨柱頭的發(fā)育表達(dá)量下降。本試驗利用以CytoTrap細(xì)胞質(zhì)酵母雙雜交系統(tǒng)篩選PCNA相互作用蛋白、5’RACE克隆、并利用實時熒光定量PCR方法分析基因的表達(dá)等。獲得主要結(jié)果如下:(1)分別以羽衣甘藍(lán)的PCNA1和PCNA2基因為模板,構(gòu)建酵母pSos-PCNA1和pSos-PCNA2誘餌表達(dá)載體,進(jìn)行酵母雙雜交自激活檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCNA1和PCNA2不存在自激活現(xiàn)象,可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的篩選。(2)以CytoTrap細(xì)胞質(zhì)酵母雙雜交系統(tǒng)檢測PCNA1與PCNA2之間的相互作用,結(jié)果顯示,PCNA1與PCNA2不僅與自身發(fā)生相互作用在它們之間也存在相互作用。(3)以pSos-PCNA1和pSos-PCNA2為誘餌載體,利用CytoTrap細(xì)胞質(zhì)酵母雙雜交系統(tǒng),通過共轉(zhuǎn)化的方法對羽衣甘藍(lán)柱頭酵母cDN...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?Ｓｏｓ招募系統(tǒng)原理圖??于Ｓｏｓ于互用，因此可于

體中，Ｓｏｓ蛋白可以代替Ｃｄｃ２５通過肉豆蓮信號（Ｍｙｒ，定??位于細(xì)胞膜）激活Ｒａｓ蛋白，使酵母菌在３７?°Ｃ生長。該系統(tǒng)中將目標(biāo)蛋白與Ｓｏｓ蛋白??融合，將被檢測蛋白與肉豆蔻信號融合，定位于細(xì)胞膜，如果目標(biāo)蛋白與被檢測蛋白相??互作用，則Ｒａｓ信號被激活，酵母細(xì)胞可在３７?°....

圖２－２?ｐＭｙｒ載體??（４）菌種：ＤＨ５ａ??

ＡＧＣＴＴＣＧｎＴＣｉ??ＰＣＮＡ２－Ｓａｌ－Ｘ?ＣＣＧＴＣＧＡＣＴＴＡＧＧＣＡＴＴＡＧＴＧＴＣＴＴＣ??ｐＭｙｒ?３’?ＣＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＧＣＧＴＧＡＣＡＴ??ｐＭｙｒ?５，?ＡＣＴＡＣＴＡＧＣＡＧＣＴＧＴＡＡＴＡＣ－３??（３）載體：ｐＳｏｓ?載體、ｐＭｙｒ?載體（Ｓｔｒ....

圖２－４?ｐＳｏｓ－ＰＣＮＡｌ雙酶切電泳圖??（Ｍ：ＤＬ２０００；ｌ：ＰＣＡ＾ｉ）

?各?３００?ｎｅ??５?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ１??６?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ２??７?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ１?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?陰性對照??８?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?陰性對照??２．３結(jié)果分析??....

圖２－５?ＰＣｉＶｆ基因ＰＣＲ電泳圖

?各?３００?ｎｅ??５?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ１??６?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?ＰＣＮＡ２??７?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ１?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?陰性對照??８?ｐＳｏｓ?ＰＣＮＡ２?＋?ｐＭｙｒ?Ｖｅｃｔｏｒ?陰性對照??２．３結(jié)果分析??....

本文編號：3897581