茄子（Solanum melongena L.）作為大眾餐桌上即為常見(jiàn)的菜,其富含大量花青素,具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,其根、莖、葉和種子具有一定藥用價(jià)值,其萼片也經(jīng)常出現(xiàn)在餐桌上,具有很好的市場(chǎng)前景。本研究針對(duì)于歐洲綠萼茄,東北紫茄,及其兩種茄子的雜交茄觀察后發(fā)現(xiàn),歐洲進(jìn)口茄萼片整個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)均為綠色,東北紫茄則隨生長(zhǎng)周期的推進(jìn),逐漸變?yōu)檩嗥?而雜交品種則隨生長(zhǎng)周期,萼片也逐漸變紫,但并非全為紫色,而是紫、綠相間。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)萼片為何會(huì)出現(xiàn)該種變化進(jìn)行了如下研究及結(jié)果分析：1.選擇三種茄子生長(zhǎng)成熟的果實(shí)萼片作為實(shí)驗(yàn)材料。分別為全綠的歐洲綠萼品種茄子,東北紫萼品種茄子,及其綠、紫相間的雜交品種。采用RACE及同源克隆的方法分別克隆了這三個(gè)品種茄子DFR及MYB 6個(gè)基因的cDNA,命名為SmDFR和SmMYB。2.DFR和MYB基因分析歐洲綠萼SmDFR基因cDNA全長(zhǎng)1016bp,從82bp-716bp為開(kāi)放閱讀框,編碼213個(gè)氨基酸,登錄號(hào)為KX224250;東北紫萼SmDFR基因cDNA全長(zhǎng)1128bp,從332bp-973bp為開(kāi)放閱讀框,共213個(gè)氨基酸,登錄號(hào)為KX224251... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
        1.1.1 歐洲綠萼茄
        1.1.2 東北紫萼茄
        1.1.3 雜交茄
    1.2 花青素概述
        1.2.1 花青素的合成途徑
        1.2.2 花青素的生理功能作用機(jī)理
            1.2.2.1 對(duì)生產(chǎn)及畜牧業(yè)的作用
            1.2.2.2 在植物生長(zhǎng)方面的作用
        1.2.3 二氫黃酮醇4-還原酶(Dihydroflavonol 4-Reductase,DFR)的研究
        1.2.4 MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究
    1.3 研究的目的及意義
    1.4 研究的方法與技術(shù)路線
        1.4.1 研究方法
        1.4.2 技術(shù)路線
2 三種茄子中花青素合成途徑中相關(guān)基因的克隆
    2.1 三種茄子的DFR和MYB基因保守區(qū)域的克隆
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)方法
            2.1.3.1 不同品種茄子萼片總RNA提取
            2.1.3.2 三種茄子DFR基因保守區(qū)域引物設(shè)計(jì)
            2.1.3.3 茄子萼片DFR基因3'RACE片段擴(kuò)增
            2.1.3.4 PCR產(chǎn)物的回收與純化
            2.1.3.5 載體連接與轉(zhuǎn)化
            2.1.3.6 陽(yáng)性克隆的篩選與鑒定
        2.1.4 結(jié)果與分析
            2.1.4.1 三種茄子萼片總RNA提取結(jié)果
            2.1.4.2 茄子DFR3'及MYB3'RACE的PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.1.4.3 茄子DFR3'RACE陽(yáng)性克隆菌液PCR檢測(cè)結(jié)果
            2.1.4.4 茄子DFR3'及MYB3'RACE測(cè)序結(jié)果
    2.2 茄子DFR、MYB基因5'RACE片段克隆
        2.2.1 試驗(yàn)材料
        2.2.2 試驗(yàn)試劑
        2.2.3 試驗(yàn)方法
            2.2.3.1 三種茄子萼片總RNA的提取
            2.2.3.2 茄子6個(gè)DFR、MYB基因5'RACE引物設(shè)計(jì)
            2.2.3.3 三種茄子萼片總RNA的反轉(zhuǎn)錄
            2.2.3.4 cDNA模板的純化
            2.2.3.5 cDNA模板的TdT加尾
            2.2.3.6 5'RACE巢式PCR反應(yīng)
            2.2.3.7 目的片段的回收與連接轉(zhuǎn)化
        2.2.4 結(jié)果與分析
            2.2.4.1 三種茄子萼片6個(gè)DFR、MYB基因5'RACE的PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.2.4.2 三種茄子DFR、MYB基因5'RACE測(cè)序結(jié)果
    2.3 茄子DFR,MYB基因全長(zhǎng)的獲得
        2.3.1 試驗(yàn)材料
        2.3.2 試驗(yàn)試劑
        2.3.3 試驗(yàn)方法
        2.3.4 試驗(yàn)結(jié)果與分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
3 三種茄子DFR、MYB基因特征及系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.1 三種茄子DFR、MYB基因的序列特征分析
        3.1.1 歐洲D(zhuǎn)FR基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.1.2 東北DFR基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.1.3 雜交DFR基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.1.4 歐洲MYB基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.1.5 東北MYB基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.1.6 雜交MYB基因序列結(jié)構(gòu)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    3.2 茄子DFR及MYB基因的同源性分析與系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.2.1 茄子DFR基因的同源性分析與系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.2.2 茄子MYB基因的同源性分析與系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 三種茄子中DFR、MYB基因的Realtime PCR
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)試劑與儀器
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 三種茄子四個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期萼片總RNA的提取
        4.3.2 Realtime PCR模板cDNA的合成
        4.3.3 Realtime PCR引物的設(shè)計(jì)
        4.3.4 三種茄子中DFR,MYB基因的Realtime PCR檢測(cè)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 三種茄子DFR基因的Realtime PCR結(jié)果分析
        4.4.2 三種茄子MYB基因的Realtime PCR結(jié)果分析
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
5 三種茄子萼片的花青素含量測(cè)定
    5.1 三種茄子四個(gè)不同生長(zhǎng)期的花青素含量測(cè)定
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)試劑
        5.1.3 試驗(yàn)方法
    5.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.2.1 三種茄子四個(gè)時(shí)期花青素含量結(jié)果
    5.3 討論
    5.4 本章小結(jié)
6 三種茄子的MYB基因的轉(zhuǎn)基因植株
    6.1 試驗(yàn)材料
        6.1.1 試驗(yàn)試劑
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 三種茄子中3個(gè)MYB基因全長(zhǎng)的擴(kuò)增
            6.2.1.1 基因利用attB-GENE-F/R引物進(jìn)行PCR
            6.2.1.2 利用attB-adapter-F/R引物進(jìn)行二次PCR
            6.2.1.3 利用attB-adapter-目的基因PCR產(chǎn)物進(jìn)行BP反應(yīng)
            6.2.1.4 使用Top 10 Ecoli.Competent轉(zhuǎn)化
            6.2.1.5 BP反應(yīng)菌液PCR檢測(cè)
            6.2.1.6 過(guò)表達(dá)Entry Clone質(zhì)粒進(jìn)行LR反應(yīng)
            6.2.1.7 使用Top 10 Ecoli.Competent轉(zhuǎn)化
            6.2.1.8 LR反應(yīng)所得菌液PCR檢測(cè)
        6.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
            6.2.2.1 重組質(zhì)粒三親雜交法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌
        6.2.3 蘸花法法遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥
            6.2.3.1 野生型擬南芥的培養(yǎng)
            6.2.3.2 侵染野生型擬南芥
            6.2.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
    6.5 試驗(yàn)結(jié)果
        6.5.1 基因利用attB-GENE-F/R引物進(jìn)行PCR
        6.5.2 農(nóng)桿菌菌液PCR
    6.6 討論
    6.7 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物二氫黃酮醇4-還原酶基因的研究進(jìn)展[J]. 李春雷,崔國(guó)新,許志茹,李玉花.  生物技術(shù)通訊. 2009(03)
[2]植物花青素合成中的MYB蛋白[J]. 許志茹,李春雷,崔國(guó)新,孫燕.  植物生理學(xué)通訊. 2008(03)



本文編號(hào)：3479939