核桃（Juglans regia）屬胡桃科胡桃屬植物,是世界著名的‘四大干果’之一,富含有益于身體健康的不飽和脂肪酸,目前在我國(guó)分布廣泛,是重要的經(jīng)濟(jì)果樹(shù)林木。目前對(duì)核桃的研究主要集中在核桃品質(zhì)、品種選育、豐產(chǎn)栽培及加工利用等方面,很少?gòu)姆肿铀教接懞颂业纳碚{(diào)控機(jī)制。近年來(lái),全球溫度的變化導(dǎo)致我國(guó)西北地區(qū)“倒春寒”現(xiàn)象頻發(fā),對(duì)核桃生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)效益造成了嚴(yán)重的影響。小分子熱激蛋白（sHSPs）是重要的抗逆響應(yīng)蛋白,但在木本植物中研究較少,特別是在核桃中的研究鮮有報(bào)道。本研究從‘香玲’核桃轉(zhuǎn)錄組中篩選獲得若干sHSP基因。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)分析其在不同溫度脅迫下的表達(dá)模式。通過(guò)構(gòu)建酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)入酵母中分析其在低溫、高溫及鹽脅迫下對(duì)酵母生長(zhǎng)的影響;構(gòu)建植物過(guò)表達(dá)載體瞬時(shí)表達(dá)核桃,分析不同溫度脅迫下的相關(guān)生理指標(biāo)來(lái)探討核桃sHSP蛋白的逆境響應(yīng)功能。本研究的主要結(jié)果如下:（1）通過(guò)分析核桃葉片組織轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),得到15條sHSP基因序列,通過(guò)BLAST、進(jìn)化分析及多序比對(duì)分析,對(duì)這些蛋白的序列特征進(jìn)行了初步分析。通過(guò)定量表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)其中JrsHSP17.3和JrsHS... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 低溫對(duì)植物的影響
    1.3 熱激蛋白的研究概述
        1.3.1 熱激蛋白簡(jiǎn)介
        1.3.2 熱激蛋白的功能
        1.3.3 小分子熱激蛋白（sHSPs）的結(jié)構(gòu)
        1.3.4 小分子熱激蛋白（sHSP）的分類(lèi)
        1.3.5 小分子熱激蛋白（sHSP）簡(jiǎn)介與功能
    1.4 本研究的目的、意義
    1.5 本研究的內(nèi)容及技術(shù)路線
第二章 核桃sHSP家族基因篩選及確認(rèn)
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與載體
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 溶液配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 核桃sHSP家族基因的篩選
        2.2.2 JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 基因的克隆
        2.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 sHSP家族基因的序列特征
        2.3.2 核桃sHSP家族基因的跨膜區(qū)預(yù)測(cè)
        2.3.3 核桃sHSP家族蛋白序列分析
        2.3.4 核桃sHSP家族基因的進(jìn)化分析
        2.3.5 核桃sHSP家族基因蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.3.6 核桃sHSP家族基因的表達(dá)特征
        2.3.7 JrsHSP17.3 基因和JrsHSP20-1 基因的定量表達(dá)分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 轉(zhuǎn)JrsHSP17.3 和JrsHSP20-1 的酵母抗逆性分析
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株和載體
        3.1.2 主要試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組質(zhì)粒和pYES2質(zhì)粒的酵母轉(zhuǎn)化及鑒定
        3.2.3 重組酵母的脅迫實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 表達(dá)載體及酵母重組子的獲得
        3.3.2 重組酵母的抗性分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 JrsHSP17.3 基因在核桃中的瞬時(shí)表達(dá)分析
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌種與載體
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 培養(yǎng)基和溶液的配制
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 核桃JrsHSP17.3 基因的過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 瞬時(shí)侵染核桃葉
        4.2.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化核桃JrsHSP17.3 基因的表達(dá)分析
        4.2.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化核桃的Southern雜交鑒定
        4.2.5 Evans blue染色
        4.2.6 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化核桃JrsHSP17.3 基因的生理指標(biāo)測(cè)定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 核桃過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.2 轉(zhuǎn)JrsHSP17.3 核桃的southern雜交分析
        4.3.3 JrsHSP17.3 基因的瞬時(shí)表達(dá)分析
        4.3.4 利用Evans blue研究瞬時(shí)侵染核桃幼苗細(xì)胞受損情況
        4.3.5 轉(zhuǎn)JrsHSP17.3 基因核桃的生理指標(biāo)分析
    4.6 討論
    4.7 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]逆境脅迫下水稻（Oryza sativa L.）rHsp90基因的克隆及功能分析[D]. 劉大麗.東北林業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3457754