果實后熟和軟化是決定其采后貨架期長短最重要的內(nèi)在因素。本文以’海沃德’獼猴桃（Actinidia deliciosa[A.Chev.]C.F.Liang et A.R.Ferguson var.deliciosa cv.Hayward）為材料,利用生物信息學分析、基因表達、啟動子分析、煙草雙熒光素酶、凝膠遷移實驗、瞬時過量表達以及轉(zhuǎn)基因等研究技術(shù)手段,篩選研究獼猴桃果實后熟軟化的相關(guān)基因,驗證相關(guān)成員在獼猴桃果實中的基因功能,確定果實成熟軟化相關(guān)基因的調(diào)控模式,并為采后獼猴桃果實成熟軟化機制提供新依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.測定了采后不同處理的獼猴桃果實多種生理指標,包括乙烯合成、可溶性固形物和淀粉含量、硬度和細胞壁組分�；谵D(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),對獼猴桃果實后熟過程中多種性狀（乙烯合成、細胞壁和淀粉降解）的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進行了轉(zhuǎn)錄分析。共篩選出26個響應(yīng)外源乙烯處理最強烈的差異表達基因,包含12個結(jié)構(gòu)基因和14個轉(zhuǎn)錄因子,而差異表達基因在1-MCP（一種乙烯抑制劑）處理組呈現(xiàn)與乙烯處理相反的表達模式。利用雙熒光素酶實驗分析了差異表達基因在體內(nèi)的調(diào)控效應(yīng),發(fā)現(xiàn)一個C2H2-型鋅指蛋白AdDof... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
縮略語表
1 緒論
    1.1 果實成熟
        1.1.1 乙烯合成與信號轉(zhuǎn)導
        1.1.2 淀粉降解
        1.1.3 細胞壁降解
        1.1.4 獼猴桃果實的成熟衰老
    1.2 果實成熟的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
        1.2.1 番茄果實成熟衰老轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
        1.2.2 其他果實成熟衰老轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
    1.3 Dof轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 Dof結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Dof生物學功能
        1.3.3 Dof與淀粉代謝
    1.4 研究目標和內(nèi)容
2 AdDof3調(diào)控獼猴桃果實采后淀粉降解
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料和處理
        2.1.2 果實指標測定
        2.1.3 RNA提取,cDNA合成和基因組DNA提取
        2.1.4 RNA-seq
        2.1.5 基因克隆與啟動子元件分析
        2.1.6 實時定量PCR
        2.1.7 煙草雙熒光素酶分析
        2.1.8 EMSA實驗
        2.1.9 亞細胞定位實驗
        2.1.10 獼猴桃轉(zhuǎn)基因
        2.1.11 GUS染色
        2.1.12 獼猴桃果瞬時過表達分析
        2.1.13 統(tǒng)計分析
        2.1.14 基因登錄號
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 獼猴桃果實成熟分析
        2.2.2 后熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)構(gòu)基因的獲得
        2.2.3 后熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)構(gòu)基因在獼猴桃成熟過程中表達分析
        2.2.4 成熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對結(jié)構(gòu)基因啟動子的調(diào)控效應(yīng)
        2.2.5 AdDof3識別AdBAM3L啟動子的結(jié)合位點研究
        2.2.6 AdBAM3L在'秦美'獼猴桃中過量表達轉(zhuǎn)基因
        2.2.7 AdDof3的獼猴桃果實瞬時過量表達分析
    2.3 討論
3 基于基因組的AdERF基因克隆與分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 AdAP2/ERF的提取與分離
        3.1.2 果實材料與處理
        3.1.3 果實指標測定
        3.1.4 RNA提取和cDNA合成
        3.1.5 AdERF家族基因克隆
        3.1.6 實時定量PCR
        3.1.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 AdERF分離與聚類分析
        3.2.2 獼猴桃ERF結(jié)構(gòu)分析
        3.2.3 不同處理對獼猴桃果實后熟軟化的影響
        3.2.4 獼猴桃ERF基因?qū)σ蚁┨幚淼捻憫?yīng)
        3.2.5 獼猴桃后熟軟化相關(guān)ERF基因在氣調(diào)處理中表達
        3.2.6 獼猴桃后熟軟化相關(guān)ERF對結(jié)構(gòu)基因啟動子的調(diào)控效應(yīng)
    3.3 討論
4 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻
附圖
作者簡歷及在學期間所取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于乙烯受體下游轉(zhuǎn)錄因子的果實品質(zhì)調(diào)控機制研究進展[J]. 徐倩,殷學仁,陳昆松.  園藝學報. 2014(09)
[2]21世紀以來世界獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展以及中國獼猴桃貿(mào)易與國際競爭力分析[J]. 張計育,莫正海,黃勝男,郭忠仁.  中國農(nóng)學通報. 2014(23)
[3]植物Dof基因家族功能研究進展[J]. 蔡曉鋒,張余洋,張俊紅,李漢霞,葉志彪.  植物生理學報. 2013(01)
[4]水果及其制品中果膠含量的比色法測定條件優(yōu)化[J]. 龐榮麗,張巧蓮,郭琳琳,方金豹,謝漢忠,李君,羅靜,吳豐魁.  果樹學報. 2012(02)
[5]乙烯調(diào)控非躍變型果實成熟衰老研究進展[J]. 蔣天梅,殷學仁,王平,孫崇德,徐昌杰,李鮮,陳昆松.  園藝學報. 2011(02)
[6]乙烯信號轉(zhuǎn)導與果實成熟衰老的研究進展[J]. 殷學仁,張波,李鮮,陳昆松.  園藝學報. 2009(01)
[7]中國獼猴桃種質(zhì)資源的研究與利用[J]. 徐小彪,張秋明.  植物學通報. 2003(06)
[8]天然產(chǎn)物中的糖含量測定方法正確性的研究[J]. 林穎,吳毓敏,吳雯,田庚元.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 1996(03)
[9]獼猴桃總淀粉酶活性與果實軟化的關(guān)系[J]. 王貴禧,韓雅珊,于梁.  園藝學報. 1994(04)



本文編號：3449655