中國水仙（Narcissus tazetta var.chinensis）是石蒜科水仙屬多年生草本植物,是觀賞價值極高的我國傳統(tǒng)花卉。由于中國水仙是三倍體植物,高度不育,一般只能通過小鱗莖進行無性繁殖,以傳統(tǒng)的雜交育種方式很難培養(yǎng)出新的品種。中國水仙品種比較稀少,花色單一,產業(yè)發(fā)展受到了影響。通過對中國水仙的花色進行分子機制方面的研究,對中國水仙花色進行創(chuàng)新。本實驗以中國水仙‘金盞銀臺’為材料,從中國水仙花瓣和副冠轉錄組數據庫中篩選出一條與類黃酮合成相關的b HLH轉錄因子,命名為Ntb HLH1,利用3′RACE技術克隆出這條基因的全長序列,同時對其進行序列分析;通過q-PCR檢測Ntb HLH1基因在中國水仙鱗莖盤以及花瓣和副冠在花苞期、始花期和盛花期的相對表達水平;構建植物表達載體,進行煙草穩(wěn)定轉化研究基因功能,并分析轉基因植株中類黃酮代謝途徑相關結構基因的表達以及轉基因植株中總黃酮和花青素含量的變化;通過酵母雙雜交實驗驗證了Ntb HLH1與7個R2R3-MYB轉錄因子互作的情況;通過雙熒光素酶試驗分析了Ntb HLH1與7個R2R3-MYB形成復合物對類黃酮合成途徑的結構基因... 

【文章來源】：福建農林大學福建省

【文章頁數】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物類黃酮合成途徑Fig.1-1Biosynthesispathwayofplantflavonoids

NtbHLH13’末端克隆Fig2-9Cloningof3’endsequenceofNtbHLH1

中國水仙類黃酮途徑bHLH基因克隆與表達分析18圖2-8NtbHLH13’RACE擴增產物R1：第一輪；R2：第二輪；R3：第三輪；M：MarkerFig.2-83’RACRamplifiedproductofNtbHLH1R1：firstround；R2：secondround；R3：thirdround；M：Marker圖2-9NtbHLH13’末端克隆Fig2-9Cloningof3’endsequenceofNtbHLH12.2NtbHLH1基因ORF序列獲得與分析用DNAMAN將通過3’RACE獲得的NtbHLH1序列與在轉錄組找到已知的部分保守序列進行拼接，通過對其進行分析可以得出NtbHLH1的ORF大小為1896bp，編碼632個氨基酸，GenBank登錄號：QDS02912.1。2.3NtbHLH1的ORF擴增根據拼接獲得NtbHLH1編碼區(qū)全長，在起始密碼子和終止密碼子處設計特

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]中國水仙類黃酮代謝抑制基因NtMYB2,NtMYB3和NtMYB4的鑒定及功能研究[D]. Muhammad Anwar.福建農林大學 2018
[2]桃花青苷著色及原花青素合成的調控機制研究[D]. 周暉.中國科學院研究生院(武漢植物園) 2015
[3]香雪蘭UDP-葡萄糖：類黃酮3-O-葡萄糖基轉移酶基因的克隆及其功能鑒定[D]. 隋昕.東北師范大學 2011
[4]蘋果bHLH轉錄因子MdTTL1對低溫誘導花青苷合成和果實著色的多途徑調控[D]. 謝興斌.山東農業(yè)大學 2011
[5]中國水仙花型、花色發(fā)育基因（NTMADS1、NtMADS3、NTPDS1和NTPZDS1）的克隆與轉化[D]. 陳段芬.中國林業(yè)科學研究院 2008

碩士論文
[1]中國水仙類黃酮代謝途徑2個R2R3-MYB基因的克隆與功能研究[D]. 吳嘉誠.福建農林大學 2018
[2]中國水仙花轉錄組分析及類黃酮代謝MYB基因功能研究[D]. 王桂青.福建農林大學 2018
[3]香雪蘭類黃酮代謝相關bHLH轉錄因子基因的克隆及其功能鑒定[D]. 單曉彤.東北師范大學 2016
[4]茶樹黃酮醇糖苷積累的研究及CsFLS基因功能的驗證[D]. 吳亞會.安徽農業(yè)大學 2016
[5]小麥黃酮醇合成酶基因TaFLS2在植物抗旱和發(fā)育中的作用[D]. 齊月英.山東大學 2016
[6]漳州水仙鱗莖盤轉錄組分析及類黃酮合成途徑基因的表達[D]. 羅鵬.福建農林大學 2014
[7]云南紅梨果皮轉錄因子MYB、bHLH和WD40互作及調控果皮著色機理研究[D]. 崔道雷.昆明理工大學 2013
[8]Hpt為選擇標記中國水仙遺傳轉化體系的建立及導入LYCB基因研究[D]. 曾原飛.福建農林大學 2012
[9]不同LED光源對番茄果實轉色過程中生理特性及果實品質的影響[D]. 陳強.山東農業(yè)大學 2009
[10]中國水仙花色相關基因的分離和反義Psy基因的遺傳轉化[D]. 鄒清成.浙江大學 2006



本文編號：3397144