現(xiàn)今對(duì)表觀遺傳的研究不僅涉及動(dòng)物,也深入到植物方面,表觀遺傳研究機(jī)理中常見的一種為DNA甲基化,主要集中研究在全基因組水平上的DNA甲基化研究及特異性基因各種甲基化與去甲基化作用上。研究全基因組DNA甲基化廣泛使用的是甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性分析（簡(jiǎn)稱MSAP）的方法,這種方法能夠從一定水平上準(zhǔn)確推測(cè)出全基因組甲基化程度,并根據(jù)測(cè)序結(jié)果發(fā)掘出有用目的基因,進(jìn)行后續(xù)功能驗(yàn)證反應(yīng)。MSAP技術(shù)主要使用2種同裂酶（對(duì)甲基敏感程度不同）切割基因組DNA,通過選擇性擴(kuò)增等PCR反應(yīng),分析判斷全基因組DNA甲基化程度。荷葉鐵線蕨在葉片、株型方面有較高的觀賞價(jià)值,是蕨類中二級(jí)珍稀孑遺植物。由于其較高的觀賞價(jià)值,目前對(duì)其在家庭、花卉市場(chǎng)等領(lǐng)域的應(yīng)用加深,近年來對(duì)荷葉鐵線蕨的研究越來越多。但是由于起步遲,且荷葉鐵線蕨一般位于深山巖石等處,所以對(duì)它的研究從引種開始,研究其快繁體系。對(duì)于分子方面研究剛開始起步。本實(shí)驗(yàn)選取荷葉鐵線蕨無性和有性生殖中各三個(gè)時(shí)期的樣品,做MSAP分析。經(jīng)MSAP技術(shù)分析結(jié)果表明,在荷葉鐵線蕨無性生殖及有性生殖中存在頻繁的DNA甲基化現(xiàn)象,并且隨著性器官的分化及分生組織的產(chǎn)生,甲基化水... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1 蕨類植物研究概況
        1.1.1 蕨類植物種質(zhì)資源研究現(xiàn)狀
        1.1.2 蕨類植物配子體發(fā)育
        1.1.3 蕨類性器官分化
        1.1.4 蕨類植物無配子生殖研究進(jìn)展
        1.1.5 荷葉鐵線蕨研究進(jìn)展
    1.2 DNA甲基化研究進(jìn)展
        1.2.1 DNA甲基化研究機(jī)理
        1.2.2 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶
        1.2.3 DNA甲基化與植物生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系
        1.2.4 DNA甲基化研究方法
        1.2.5 基因CpG島預(yù)測(cè)
    1.3 本研究具體內(nèi)容
    1.4 本研究的目的及意義
2.材料和方法
    2.1 研究材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 CTAB法提取DNA
        2.3.2 MSAP分析
        2.3.3 聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳
        2.3.4 差異條帶統(tǒng)計(jì)
        2.3.5 目的條帶切膠回收
        2.3.6 測(cè)序
        2.3.7 熒光實(shí)時(shí)定量分析
3.結(jié)果與分析
    3.1 MSAP結(jié)果分析
        3.1.1DNA提取結(jié)果檢測(cè)結(jié)果
        3.1.2 雙酶切及預(yù)擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.3 選擴(kuò)結(jié)果分析
    3.2 測(cè)序結(jié)果分析
    3.3 相關(guān)基因CpG島預(yù)測(cè)
    3.4 S2P家族蛋白和WRKY轉(zhuǎn)錄因子qRT-PCR表達(dá)
4.討論
    4.1 實(shí)驗(yàn)體系構(gòu)建
    4.2 荷葉鐵線蕨配子體發(fā)育及性器官分化中DNA甲基化分析
    4.3 S2P家族蛋白和WRKY轉(zhuǎn)錄因子的分析
    4.4 S2P家族蛋白和WRKY轉(zhuǎn)錄因子實(shí)時(shí)定量
5.結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3371544