蠟梅（Chimonanthus praecox（L.）Link）,以其香氣沁人心脾,花覆蠟質(zhì)而聞明,是我國特有的冬季開花的木本植物。但蠟梅花色主要為黃色,有些品種花內(nèi)被片可呈現(xiàn)程度不同的紅色,在蠟梅的生產(chǎn)和研究中,探究蠟梅花色的成因及差異成為亟待解決的問題。本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)中紅心蠟梅29號（H29）為研究材料,通過應(yīng)用H29轉(zhuǎn)錄組文庫數(shù)據(jù),分析篩選出在蠟梅花色代謝通路中起關(guān)鍵作用的類黃酮3’-羥化酶（flavonoid 3’-hydroxylase,F3’H）,克隆得到紅心蠟梅F3’H基因的全長,并命名為CpF3’H。同源重組法構(gòu)建pCAMBIA1302CpF3’H表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌花序浸蘸法導(dǎo)入擬南芥F3’H缺失突變體N799662中進(jìn)行功能驗(yàn)證。同時(shí),通過對不同器官及花色相關(guān)的不同時(shí)期做實(shí)時(shí)定量（qRT-PCR）表達(dá)分析來探究該基因在蠟梅中的表達(dá)模式。此外,通過FPNI-PCR和Takara Genome Walking Kit克隆得到該基因的啟動(dòng)子片段,命名為CpF3’HP,生物信息學(xué)分析表明該序列具有典型的啟動(dòng)子順式組件,通過分析啟動(dòng)子部分的順式作用組件來進(jìn)一步分析該基因... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物花青素合成途徑Fig.1Anthocyaninbiosynthesispathwayinplants.

蠟梅類黃酮類花色合成代謝途徑Fig.2FlavonoidbiosynthesispathwayinChimonanthuspraecox(L.)Link

(1) 實(shí)驗(yàn)材料：華農(nóng)校園內(nèi)H29紅心蠟梅，選取蠟梅的不同組織器官根，莖，葉，花朵，果實(shí)5個(gè)部分，花色變化的三個(gè)時(shí)期(未轉(zhuǎn)色花芽，轉(zhuǎn)色花芽，盛花花朵)和蠟梅的中被片，內(nèi)被片(如圖3)。(2) 實(shí)驗(yàn)試劑：TAKARA公司的SYBR Premix EX Taq(Perfect Real time染料法實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒。(3) 實(shí)驗(yàn)儀器：美國ABI生物公司的7500 Fast Real-time RCR System其他所需試劑、儀器同前。2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法(1) 分別提取蠟梅的根，莖，葉，花，果不同組織器官和與花色相關(guān)的不同時(shí)期及部位(未轉(zhuǎn)色的花芽，轉(zhuǎn)色的花芽，花朵以及花朵的中被片和內(nèi)被片如圖3)的RNA，每個(gè)時(shí)期樣品設(shè)置三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，分別反轉(zhuǎn)錄成cDNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于TAKARA公司。cDNA存放于-20℃冰箱備用。(2) Real time qPCR(qRTPCR)① 根據(jù)CpF3'H基因非保守結(jié)構(gòu)區(qū)域設(shè)計(jì)qRTPCR引物(表2)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]PttKN1基因在矮牽牛和擬南芥中的遺傳轉(zhuǎn)化及其功能分析[D]. 胡鑫.蘭州大學(xué) 2007

碩士論文
[1]兩個(gè)蠟梅花色相關(guān)bHLH類轉(zhuǎn)錄因子的克隆與功能初探[D]. 宋曉惜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]蠟梅花揮發(fā)物組分測定及芳樟醇合成酶啟動(dòng)子分析[D]. 李瑩瑩.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]蠟梅查爾酮合成酶基因（CHS）啟動(dòng)子及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的克隆與功能分析[D]. 方子義.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]蠟梅MYB抗逆轉(zhuǎn)錄因子和其他相關(guān)基因的克隆及功能初探[D]. 任海龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3246892