發(fā)布時間：2021-06-13 18:35

　　木霉菌（Trichoderma spp.）具有防治作物病害、促進植物生長、土壤修復等重要功能,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占據(jù)著極其重要的地位。本文首次針對我國南方部分（三省一直轄市）農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)的土壤樣品進行木霉菌的采集、分離、篩選及鑒定,明確了木霉種類的區(qū)域分布、豐度及多樣性特征,為木霉菌的資源挖掘及應用開發(fā)提供了理論依據(jù)；利用T-RFLP技術明確了木霉豐度與土壤微生物群落多樣性的關系,為更快速有效的發(fā)掘和利用木霉資源奠定了基礎；通過對所分離的木霉菌株進行多功能拮抗菌株的篩選,為生防木霉菌劑的開發(fā)、農(nóng)業(yè)作物病害的防治提供了菌株來源；利用Real-time PCR技術定量檢測田間葡萄灰霉病病原菌孢子含量與田間病情指數(shù)關系,為葡萄灰霉病的快速診斷及病害預警做出有效的判斷；最后通過田間試驗評估所篩選優(yōu)良生防木霉菌株預防及治療田間葡萄灰霉病的效果,明確了生防木霉菌劑可以作為優(yōu)良的化學農(nóng)藥的替代藥劑,對提高葡萄品質(zhì)和產(chǎn)量,促進有機水果的推廣應用,農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重大意義。研究結果如下：采集南方四省市農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)土壤樣品156份,經(jīng)形態(tài)學及內(nèi)轉錄間隔區(qū)（ITS）、翻譯延長因子（Tef1-α）序列的分子生物... 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 木霉菌的分布及國內(nèi)現(xiàn)有種類記述
    1.2 木霉菌分類與鑒定研究進展
        1.2.1 木霉菌形態(tài)學分類研究進展
        1.2.2 木霉菌分子生物學分類研究進展
    1.3 木霉和土壤微生物多樣性的相關性
    1.4 木霉在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應用研究
        1.4.1 木霉菌在生物防治中的研究進展
        1.4.2 木霉促生長功能研究進展
        1.4.3 木霉幾丁質(zhì)酶活性研究進展
    1.5 木霉菌對葡萄灰霉病的研究進展
    1.6 研究目的和意義
    1.7 研究內(nèi)容與技術路線
        1.7.1 研究內(nèi)容
        1.7.2 技術路線
第2章 木霉菌的采集、分離、篩選及鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 樣品采集地
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 培養(yǎng)基
    2.2 方法
        2.2.1 樣品采集及保存
        2.2.2 木霉菌株分離
        2.2.3 木霉的純化與保存
        2.2.4 木霉菌的形態(tài)學鑒定
        2.2.5 木霉菌的分子鑒定
        2.2.6 目的基因的序列測定
        2.2.7 系統(tǒng)發(fā)育進化樹的構建
    2.3 結果與分析
        2.3.1 木霉菌株種類鑒定
        2.3.2 木霉新紀錄種
        2.3.3 木霉菌株種類遺傳多樣性研究
        2.3.4 木霉菌株分布多樣性研究
    2.4 結論與討論
第3章 農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)木霉與土壤微生物多樣性相關性分析
    3.1 材料
        3.1.1 土壤樣品
        3.1.2 試劑與儀器
    3.2 方法
        3.2.1 土壤總基因組DNA提取
        3.2.2 真菌ITS區(qū)及細菌16S rDNA PCR擴增
        3.2.3 PCR擴增產(chǎn)物回收
        3.2.4 PCR產(chǎn)物酶切
        3.2.5 消化片段檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結果與分析
        3.3.1 土壤總基因組DNA提取
        3.3.2 土壤DNA的擴增及純化回收
        3.3.3 Msp Ⅰ、Hae Ⅲ酶切對土壤群落微生物T-RFLP的影響
        3.3.4 不同地區(qū)土壤樣品真細菌微生物群落T-RFLP酶切圖譜分析
        3.3.5 不同木霉分離樣品土壤微生物群落多樣性分析
        3.3.6 不同土壤樣品酶切圖譜相似性分析
    3.4 結論與討論
第4章 多功能生防木霉菌株的篩選
    4.1 材料
        4.1.1 供試材料
        4.1.2 培養(yǎng)基
    4.2 方法
        4.2.1 木霉菌對不同病院真菌平板對峙培養(yǎng)評價
        4.2.2 木霉菌株對黃瓜幼苗促生長作用的評價
        4.2.3 木霉菌幾丁質(zhì)酶活性測定
    4.3 結果與分析
        4.3.1 木霉菌對不同病原真菌平板對峙培養(yǎng)評價
        4.3.2 木霉菌株對黃瓜幼苗的促生長效果
        4.3.3 幾丁質(zhì)酶活性測定
    4.4 結論與討論
第5章 哈茨木霉對葡萄灰霉病菌的田間防治及灰霉病的快速診斷
    5.1 材料
        5.1.1 試劑及儀器
        5.1.2 葡萄樣品與供試菌株
        5.1.3 供試品種與藥劑
        5.1.4 試驗地概況
    5.2 方法
        5.2.1 試驗設計
        5.2.2 田間病害施藥與調(diào)查方法
        5.2.3 DNA的提取
        5.2.4 Real-time PCR反應條件及反應體系
        5.2.5 標準品的制備
        5.2.6 標準曲線的繪制
        5.2.7 田間葡萄樣品灰葡萄孢菌DNA的定量檢測
        5.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析
    5.3 結果與分析
        5.3.1 上海市設施葡萄灰霉病發(fā)病情況
        5.3.2 不同葡萄設施栽培模式下葡萄灰霉病病害發(fā)生情況
        5.3.3 不同栽培模式下施用復合哈茨木霉菌、幾丁聚糖治療葡萄灰霉病效果分析
        5.3.4 葡萄組織樣品基因組DNA提取
        5.3.5 Real time PCR標準曲線的建立
        5.3.6 田間葡萄灰霉病分子病情指數(shù)的檢測
    5.4 結論與討論
第6章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
參考文獻
致謝
碩士期間已發(fā)表論文



本文編號：3228095