植物與病原物互作能夠引起以水楊酸（salicylic acid, SA）、茉莉酸（jasmonic acid,JA）和乙烯（ethylene, ET）介導的防衛(wèi)反應。本研究利用雙向電泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）技術對根腫菌侵染的大白菜根系進行了差異表達蛋白分析。試圖找到與防衛(wèi)反應有關的信號途徑中相關蛋白,為揭示大白菜抗根腫病作用機制提供線索,主要研究結(jié)果如下：1.用新鮮的根腫菌侵染大白菜根系,通過顯微壓片觀察技術,在侵染第5天時觀察到絕大多數(shù)孢子進入根毛侵染期,所以將根腫菌接種第5天定為侵染初期。2.通過對蛋白上樣量及根系用量優(yōu)化試驗,進行大白菜根系蛋白雙向電泳時,最佳蛋白上樣量為1000gg,采用Trizol沉淀法提取蛋白,幼苗根系用量不得少于1.5g。3.通過對根腫菌侵染和未接菌的大白菜根系蛋白進行2-DE凝膠電泳,并經(jīng)PDQuest8.0.1軟分析,得到重復凝膠圖上的蛋白點均達400多個。找出蛋白質(zhì)豐度差異變化在2倍以上差異蛋白點共有48個,選取其中的19個差異點,進行質(zhì)譜鑒定,鑒定成功的差異蛋白點共有18個,它們的Pro... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
1 文獻綜述
    1.1 根腫菌及根腫病的概述
        1.1.1 根腫菌分類地位及生活史
        1.1.2 根腫菌發(fā)病條件及生活史
        1.1.3 根腫菌的生理小種
    1.2 大白菜抗根腫病遺傳規(guī)律及抗病基因的研究進展
        1.2.1 大白菜抗根腫病遺傳規(guī)律的研究
        1.2.2 大白菜抗根腫病基因的研究進展
    1.3 植物防衛(wèi)反應研究進展
        1.3.1 植物-病原物互作的防衛(wèi)反應中相關基因的研究進展
        1.3.2 大白菜-根腫病互作的防衛(wèi)反應相關研究進展
    1.4 雙向電泳在植物中的應用
        1.4.1 生物脅迫
        1.4.2 非生物脅迫
        1.4.3 蛋白質(zhì)組學在抗病分子機制研究中的應用
    1.5 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 試材
        2.1.2 根腫菌來源
    2.2 方法
        2.2.1 配制根腫菌休眠孢子懸浮液的方法
        2.2.2 水培苗的獲得
        2.2.3 接菌與觀察
        2.2.4 取樣與制備蛋白質(zhì)樣品
        2.2.5 雙向電泳(2-DE)
        2.2.6 質(zhì)譜鑒定
        2.2.7 生物信息學分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 侵染初期的確定
    3.2 上樣量對2-DE圖譜的影響
    3.3 大白菜侵染初期根系最佳用量的優(yōu)化
    3.4 分析2-DE圖譜及差異蛋白點
    3.5 質(zhì)譜鑒定
    3.6 生物信息學分析
        3.6.1 Gene Ontology(GO)分析
        3.6.2 KEGG分析
    3.7 幾個防衛(wèi)基因的功能預測
        3.7.1 差異點3414的功能預測
        3.7.2 差異點3038的功能預測
        3.7.3 差異點2358的功能預測
        3.7.4 差異點4043的功能預測
        3.7.5 差異點3129的功能預測
4 討論
    4.1 水培接菌及侵染初期的確定
    4.2 根腫菌與防衛(wèi)信號傳導途徑
        4.2.1 水楊酸介導的防衛(wèi)反應相關蛋白分析
        4.2.2 茉莉酸和乙烯介導的防衛(wèi)反應相關蛋白分析
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]大白菜根系蛋白質(zhì)雙向電泳體系優(yōu)化[J]. 趙玲玲,畢青,周雪,冀瑞琴,馮輝.  分子植物育種. 2015(01)
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[6]云南和西藏十字花科蔬菜根腫病菌生理小種鑒定[J]. 劉峰,張麗輝,姬廣海.  中國蔬菜. 2013(20)
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[10]大白菜抗根腫病CRb基因緊密連鎖標記的開發(fā)與定位[J]. 陳慧慧,張騰,梁珊,陳兵,張椿雨,樸鐘云.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2012(17)

博士論文
[1]低溫脅迫下野牛草生理生化響應及蛋白質(zhì)組學研究[D]. 康俊梅.中國農(nóng)業(yè)科學院 2008

碩士論文
[1]大白菜根響應根腫菌侵染的基因表達研究[D]. 譚翀.云南農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]大白菜根腫病抗性基因分子標記與定位[D]. 薛銀鴿.鄭州大學 2014
[3]白菜類作物抗根病種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及分子標記輔助選擇[D]. 董森森.鄭州大學 2014
[4]大白菜抗霜霉病防御信號途徑中相關基因的表達分析[D]. 高婷婷.揚州大學 2013
[5]蕓薹根腫菌生活史研究I[D]. 羅紅春.西南大學 2013
[6]番茄葉色黃化突變體差異蛋白研究及分析[D]. 徐磊.東北農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：3199938