發(fā)布時間：2021-05-01 00:18

　　蓮藕（Nelumbo nucifera Gaertn.）為多年生草本水生植物藕蓮膨出肥大的根狀莖,是一種深受人們喜歡的藥食同源性食品。由于它有著豐富的藥用價值與營養(yǎng)價值,人們對其加工品及鮮食的需求量不斷加大。但是,蓮藕在加工、貯藏與運輸過程中普遍存在失水萎蔫、褐變等問題,導(dǎo)致商品性下降,鮮食貨架期短,嚴(yán)重影響了蓮藕鮮食和加工產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯。由前人探索發(fā)現(xiàn),多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）是導(dǎo)致蓮藕發(fā)生酶促褐變的關(guān)鍵酶之一。本文利用生物信息學(xué)方法鑒定并分析了所有PPO基因家族成員,并通過試劑盒以及q RT-PCR方法分別檢測PPO和其家族基因在不同組織、不同生長時間、不同誘導(dǎo)因子下的活性與響應(yīng)。在實驗室前期的基礎(chǔ)上,通過q RT-PCR以及酵母雙雜交方法對PPO1與其互作基因GLK1、NADH的表達和互作位點進行分析。主要得出以下結(jié)果:1. 根據(jù)蓮藕PPO家族序列的結(jié)構(gòu)域,在蓮基因組數(shù)據(jù)庫中進行比對搜索,再通過Pfam網(wǎng)站驗證得到4個基因家族成員:PPO1、PPO4、AS-1與AS-2。利用生物信息學(xué)方法對其理化性質(zhì)、跨膜區(qū)、信號肽、基因結(jié)構(gòu)、保守基序、二級與三... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 蓮藕概述
    1.2 植物多酚氧化酶
        1.2.1 PPO基因大小及結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 PPO的多基因家族性及其表達
        1.2.3 PPO的生理功能與生化特性
    1.3 GLK1轉(zhuǎn)錄因子概述
    1.4 NADH脫氫酶概述
    1.5 酵母雙雜交系統(tǒng)
    1.6 研究的目的及意義
第二章 蓮藕PPO基因家族的鑒定與分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 材料
        2.1.2 試劑及試劑盒
        2.1.3 引物合成
        2.1.4 試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 蓮藕PPO基因家族成員的確定
        2.2.2 家族成員的生物信息學(xué)分析
        2.2.3 誘導(dǎo)處理液濃度的確定
        2.2.4 多酚氧化酶活性的測定
        2.2.5 家族成員基因的表達分析
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 蓮藕PPO基因家族的鑒定及理化性質(zhì)分析
        2.3.2 蓮藕PPO家族成員蛋白跨膜區(qū)及信號肽的預(yù)測分析
        2.3.3 蓮藕PPO家族基因結(jié)構(gòu)與蛋白保守基序的預(yù)測分析
        2.3.4 蓮藕PPO家族蛋白二級與三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析
        2.3.5 誘導(dǎo)處理液濃度的確定
        2.3.6 多酚氧化酶活性分析
        2.3.7 PPO基因的表達分析
    2.4 討論
第三章 蓮藕PPO1 與其互作基因GLK1、NADH的表達分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑及試劑盒
        3.1.3 引物合成
        3.1.4 試劑的配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 葉綠素含量的測定
        3.2.2 超氧陰離子自由基含量的測定
        3.2.3 GLK1、NADH的表達分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 葉綠素含量的分析
        3.3.2 超氧陰離子自由基含量的分析
        3.3.3 PPO1與其互做基因GLK1、NADH的表達分析
    3.4 討論
第四章 蓮藕PPO1與GLK1互作結(jié)構(gòu)域分析
    4.1 試驗材料
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑及試劑盒
        4.1.3 菌株及質(zhì)粒
        4.1.4 引物合成與測序
        4.1.5 常用培養(yǎng)基及試劑
    4.2 試驗方法
        4.2.1 蓮藕JD-PPO1互作結(jié)構(gòu)域的確定
        4.2.2 蓮藕GLK1互作結(jié)構(gòu)域的確定
    4.3 結(jié)果分析
        4.3.1 JD-PPO1的結(jié)構(gòu)域分析與截短設(shè)計
        4.3.2 GLK1的結(jié)構(gòu)域分析與截短設(shè)計
        4.3.3 JD-PPO1與GLK1 的截短互作驗證
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
附錄A 實驗附表
附錄B 試劑及常用培養(yǎng)基配方
附錄C 核酸序列
致謝
作者簡介



本文編號：3169764