番茄是一種重要的蔬菜作物,同時也是研究漿果果實發(fā)育的模式植物。番茄果實大小和形狀不僅決定其產(chǎn)量還和其品質(zhì)性狀直接相關(guān)。番茄果實發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)非常復(fù)雜,轉(zhuǎn)錄因子在其中扮演著十分重要的角色。本實驗室之前為了揭示番茄早期果實發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),通過對早期果實多個時期的子房壁和胚珠進行轉(zhuǎn)錄組測序,發(fā)現(xiàn)了多個在早期果實子房壁或胚珠中特異表達的轉(zhuǎn)錄因子。本研究中利用CRISPR/Cas9技術(shù)獲得了早期果實子房壁特異表達轉(zhuǎn)錄因子Solyc11g008830（SlAS2）的突變體,與野生型Moneymaker（MM）相比,該突變體的果實變小、縱橫比增加、果皮細胞層數(shù)減少和果皮厚度變薄,表明SlAS2參與調(diào)控番茄果實發(fā)育。進一步研究發(fā)現(xiàn),該突變體5天和綠熟時期的果實果皮中細胞層數(shù)較野生型顯著減少,說明突變體果實形態(tài)的改變有可能是由SlAS2的突變抑制了番茄果皮中的細胞分裂造成的。不僅如此,SlAS2突變體的花瓣明顯變小,葉片極性改變,而且葉片呈杯狀和針狀,因此SlAS2具有和擬南芥中同源基因AS2相似的功能,也在葉極性發(fā)育和頂端分生組織維持中發(fā)揮重要作用。SlTKN3（Solyc05g005090）作為擬南... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

番茄果實的發(fā)育過程（Azzietal.,2015）

圖 2.1 果形分析的示意圖Fig 2.1 Schematic diagram of fruit shape analysis報告實驗實驗使用的載體是雙熒光素酶報告質(zhì)粒 pluc-35Rlu90（SlTKN3）大約 3-kb 左右的啟動子，之后通過無到雙熒光素酶報告質(zhì)粒 pluc-35Rluc 的 luc 上N3 pro-LUC 。從 MM 果實的 cDNA 中擴增 S2）cDNA 全長，之后通過雙酶切連接的方式ag 的 35S 下游，即得到效應(yīng)因子 CaMV35S-SlAS1 和效應(yīng)因子構(gòu)建所用的引物。之后將報告因子和效準備好的菌液打入煙草葉片中，2 天后收集煙草葉910）和 Promega 公司的 GLOMAX 20/20 LUMINO素酶活性，相關(guān)實驗操作按照說明書進行。引物詳轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析slas2-cr1 0 DPA果實中提取的總RNA送去公司建庫

國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 SlAS2 和 SlTKN3 調(diào)控番茄果實發(fā)育的功能研.2 結(jié)果與分析.2.1 SlAS2基因的組織表達分析我們前期的研究結(jié)果顯示，SlAS2 在 0 DPA、1 DPA、2 DPA 和 5 DPA 的子房壁中表達水平，而在胚珠中幾乎不表達，而且在 0 DPA 的子房壁中表達水平較其他幾個時期更高，表明 SlA一個早期果實子房壁特異表達基因（Zhang et al., 2016）。為了進一步驗證 RNA-seq 的結(jié)果，利用定量 PCR 技術(shù)檢測 SlAS2 在栽培番茄 MM 不同發(fā)育時期子房壁和胚珠中的表達水平， SlAS2 在 0 DPA、2 DPA、5 DPA、10 DPA 和 20 DPA 果實子房壁中的表達水平很高，而在各期的胚珠中幾乎不表達（圖 2.2A）。其中 SlAS2 在 0 DPA 和 2 DPA 時期的果實子房壁中表達較其他幾個時期更高，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一致。不僅如此，我們還利用 SlAS2 啟動子驅(qū)US 報告基因的表達，然后對轉(zhuǎn)基因陽性植株的早期果實進行 GUS 染色。發(fā)現(xiàn) SlAS2 在 0 D 5 DPA 的子房壁、橫隔和胎座中均表達，在 0 DPA 時的表達活性較高，而在兩個時期的胚珠乎不表達（圖 2.2B）。


本文編號：3144754