發(fā)布時(shí)間：2021-04-15 05:44

　　玫瑰（Rosa rugosa Thunb.）是傳統(tǒng)的精油用花卉,玫瑰精油的主要成分為香茅醇、香葉醇等單萜醇及其乙酸酯類衍生物乙酸香茅酯、乙酸香葉酯等。我們前期研究發(fā)現(xiàn),脫氧木酮糖5-磷酸還原異構(gòu)酶（RrDXR）和Alcohol acyl transferase醇類乙�；D(zhuǎn)移酶（RrAAT）基因是玫瑰單萜類花香成分生物合成途徑中的關(guān)鍵基因。本研究構(gòu)建了這兩個(gè)基因的超表達(dá)載體、建立了矮牽牛再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系,并嘗試通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入矮牽牛,以驗(yàn)證其功能,主要研究結(jié)果如下：1、以‘唐紅’玫瑰盛開期花瓣為試材,利用CTAB法提取其總RNA,獲取目的基因后成功構(gòu)建了pCAMBIA1304-DXR和pCAMBIA1304-AAT超表達(dá)載體,并導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105保存?zhèn)溆?為目的基因轉(zhuǎn)化矮牽牛進(jìn)一步驗(yàn)證其功能奠定了基礎(chǔ)。2、試驗(yàn)通過MS培養(yǎng)基直接播種無菌種子的方法繁殖矮牽�！疎AGLE’無菌材料。通過使用不同的滅菌方法添加不同濃度的激素組合,篩選出誘導(dǎo)矮牽牛愈傷組織產(chǎn)生分化以及生根的最佳滅菌方法和培養(yǎng)基,建立了矮牽牛的再生體系。實(shí)驗(yàn)表明,最佳滅菌方法為采用75%的酒精消毒,種子發(fā)芽率最高為9... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?乂（左）和公桃（右）的ＰＣ民產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè)??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ａ：?的ＰＣ民產(chǎn)物?Ｄ：公尤欠的ＰＣ民產(chǎn)物??

２．２重組質(zhì)粒的酶切驗(yàn)證及測(cè)序分析??對(duì)構(gòu)建好的重組質(zhì)粒進(jìn)行（ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－Ｚｉ邱：化化ＩＩ／化／Ｉ?；?ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４－乂??公Ｓ化ＩＩＷｃｏＩ）雙酶切，同時(shí)雙酶切ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４作為陰性對(duì)照，電泳檢測(cè)結(jié)果如圖２－１、??２－２所示。圖２－１結(jié)果顯示Ａ１－Ａ６均切出一條約ＨＯＯｂｐ的條帶，陰性對(duì)照Ｎ則顯示一條長(zhǎng)??約ｌＯＯＯＯｂｐ的條帶；圖２－２結(jié)果顯示Ｄ１－Ｄ６均切出一條約１５００ｂｐ的條帶，陰性對(duì)照Ｎ同??樣顯示一條長(zhǎng)約ｌ〇〇（Ｋ）ｂｐ的條帶，由此初步證明，心ｒ與。進(jìn)？均己成功插入表達(dá)載體??ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４。??Ｍｌ?Ｎ?ＡＩ?Ａ２?Ａ３?Ａ４?ＡＳ?Ａ６?Ｍ２??蠢帛皆??：？〇ｈｐ?一?禱尋??看、；．達(dá)麵??圖２－１重組質(zhì)粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－兌的雙酶切結(jié)果??Ｍ１?：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：雙酶切結(jié)果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?化ｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＣＡＭ目ＩＡ１３０４－．心ｒ??Ｍｌ；?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??雨?一??ｅ

２．２重組質(zhì)粒的酶切驗(yàn)證及測(cè)序分析??對(duì)構(gòu)建好的重組質(zhì)粒進(jìn)行（ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－Ｚｉ邱：化化ＩＩ／化／Ｉ?；?ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４－乂??公Ｓ化ＩＩＷｃｏＩ）雙酶切，同時(shí)雙酶切ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４作為陰性對(duì)照，電泳檢測(cè)結(jié)果如圖２－１、??２－２所示。圖２－１結(jié)果顯示Ａ１－Ａ６均切出一條約ＨＯＯｂｐ的條帶，陰性對(duì)照Ｎ則顯示一條長(zhǎng)??約ｌＯＯＯＯｂｐ的條帶；圖２－２結(jié)果顯示Ｄ１－Ｄ６均切出一條約１５００ｂｐ的條帶，陰性對(duì)照Ｎ同??樣顯示一條長(zhǎng)約ｌ〇〇（Ｋ）ｂｐ的條帶，由此初步證明，心ｒ與。進(jìn)？均己成功插入表達(dá)載體??ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４。??Ｍｌ?Ｎ?ＡＩ?Ａ２?Ａ３?Ａ４?ＡＳ?Ａ６?Ｍ２??蠢帛皆??：？〇ｈｐ?一?禱尋??看、；．達(dá)麵??圖２－１重組質(zhì)粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－兌的雙酶切結(jié)果??Ｍ１?：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：雙酶切結(jié)果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?化ｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＣＡＭ目ＩＡ１３０４－．心ｒ??Ｍｌ；?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??雨?一??ｅ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]玫瑰葉片直接再生及其影響因素[J]. 邢文,包穎,丁萌,傅小鵬,包滿珠,寧國(guó)貴.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(01)
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[3]花香代謝與調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 孔瀅,孫明,潘會(huì)堂,張啟翔.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(02)
[4]陽春砂DXR超表達(dá)提高轉(zhuǎn)基因煙草DXR活性及光合色素含量[J]. 劉卉,楊錦芬,詹若挺,魏潔書,朱煥秋,陳蔚文.  廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(01)
[5]花香的生物合成、調(diào)控及基因工程研究進(jìn)展[J]. 樊榮輝,黃敏玲,鐘淮欽,吳建設(shè),葉秀仙.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2011(09)
[6]植物花香代謝調(diào)節(jié)與基因工程研究進(jìn)展[J]. 趙印泉,周斯建,彭培好,潘會(huì)堂,張啟翔.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2011(04)
[7]玫瑰精油的開發(fā)利用[J]. 滕祥金,郝再彬,孟滕.  北方園藝. 2011(07)
[8]不同基因型矮牽牛高頻再生體系建立的研究[J]. 呂晉慧,王玄,王媛,楊明霞.  山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(02)
[9]植物萜類合成酶及其代謝調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 岳躍沖,范燕萍.  園藝學(xué)報(bào). 2011(02)
[10]幾種玫瑰的園林特性及開發(fā)價(jià)值[J]. 李玉舒.  北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(06)

碩士論文
[1]百合苯甲酸甲酯代謝相關(guān)LiBSMT基因的克隆與分析[D]. 王歡.北京林業(yè)大學(xué) 2015
[2]夜來香生物鐘及花香基因的克隆[D]. 呂恃衡.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[3]玫瑰單萜代謝相關(guān)基因RrDXS和RrLIS的克隆與表達(dá)分析[D]. 李婷琳.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[4]玫瑰花香成分生物合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 陳陳.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[5]玫瑰活體香氣和花水成分及含量變化研究[D]. 虞伊林.上海交通大學(xué) 2012
[6]中國(guó)水仙（Narcissus tazetta L.var.chinensis Roem）花香相關(guān)基因DXPS、DXR和PAL的克隆[D]. 馬傳營(yíng).福建農(nóng)林大學(xué) 2010
[7]玫瑰微體快繁技術(shù)體系的建立[D]. 盧緒娟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[8]玫瑰精油后產(chǎn)物的綜合利用研究[D]. 杜鵑.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3138755