【摘要】：柑橘是我國重要的日常水果,市場上常采用貯藏的方式來延長柑橘供應期。然而在貯藏期間,柑橘果實不僅風味變淡,還積累異味物質(zhì)乙醛和乙醇,食用價值大大降低,嚴重影響消費者體驗。為此,就不同柑橘品種果實乙醛、乙醇積累差異以及溫度和涂蠟對普通i*柑果實乙醛、乙醇積累的影響開展了研究,主要結果如下:1.為解決紫外法和氮藍四唑法無法準確測定部分樣品乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性的問題,建立了一種基于3-甲基-2-苯并噻唑腙(3-methyl-2-benzothiazole hydrazine,MBTH)的ADH酶活性測定方法。該法采用HC1終止酶反應,反應時間可控,配合酶標板可實現(xiàn)樣品批量測定,且在靈敏度和準確度方面均優(yōu)于紫外法和氮藍四唑法。2.從公開的柑橘基因組數(shù)據(jù)中鑒別出14個ADH和2個PDC(pyruvate decarboxylase,丙酮酸脫羧酶)家族成員,并基于2個甜橙果肉轉錄組數(shù)據(jù)確定了在果肉中表達較強的6個AADH成員和2個PDC成員。3.以7種寬皮柑橘、5種甜橙、1種雜柑和3種柚共4個大類16個柑橘品種為實驗材料開展了貯藏試驗,對果實中乙醛和乙醇積累的品種間差異進行了研究。發(fā)現(xiàn)不同種類柑橘在乙醛、乙醇含量上有所差異,采收期果實相差幅度達20.8倍和61.1倍。大多數(shù)柑橘貯藏期間乙醛、乙醇含量升高,如普通i*柑貯藏60 d時乙醛和乙醇含量分別是0 d時的8.8倍和48.7倍,但冰糖橙和玉環(huán)柚在貯藏期間乙醛和乙醇含量變化不大(增加幅度不超過1倍甚至降低)。ADH酶活性在品種間差異高達201.5倍左右(采收期果實),大多在貯藏期間趨于上升(廣橙除外)。ADH1表達在多數(shù)柑橘中隨貯藏增強,而AADH2和ADH3僅在個別柑橘貯藏60 d時表達增強。PDC活性在品種間也存在差異,采收期果實相差幅度高達6.7倍,但酶活性在貯藏期間變化不大。PDC1和PDC2表達在不同柑橘品種間以及貯藏期間的變化幅度也較小,大多不超過1倍。乙醛和乙醇含量、ADH和PDC酶活性、ADH和PDC各成員表達之間的相關性分析表明PDC酶活性和基因表達與乙醛、乙醇積累密切相關,而ADH酶活性與乙醛和乙醇積累相關性較弱,表明PDC可能是調(diào)控柑橘采后果實乙醛和乙醇積累的限制因子。4.為進一步探討ADH和PDC在乙醛、乙醇積累中的作用,比較了不同溫度貯藏和涂蠟處理的效應。研究表明,低溫下(5℃)普通碰柑在貯藏初期乙醛、乙醇含量雖呈上升趨勢,但增勢較緩,且含量始終低于15℃下貯藏的i*柑,然而在90 d時乙醇含量增至與15℃下接近而乙醛含量則高于15℃下,伴有ADH和PDC表達高于15℃果實,但ADH酶和PDC酶活性略低于15℃。就i*柑而言,ADH酶活性與乙醛含量相關性可達0.9以上。涂蠟處理后普通碰柑果實中乙醛和乙醇隨貯藏不斷積累,后期一直高于對照,伴有高于對照的ADH和PDC酶活性以及基因表達。ADH酶和PDC酶活性分別與乙醛和乙醇含量高度相關。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S666
【圖文】：

２．２．２顯色反應的穩(wěn)定時間逡逑選取了乙醛標準溶液中的任意三個濃度（濃度高低依次為Ａ＜Ｂ＜Ｃ）對顯逡逑色反應的穩(wěn)定時間進行了分析。由實驗結果圖２．１我們可以看出，不同濃度的乙逡逑醛溶液在顯色反應后的１２邋ｈ內(nèi)均能夠保持較高的穩(wěn)定性（Ａ／Ａ0＞邋８５％），但濃度逡逑越高，顯色穩(wěn)定性下降。而在實際實驗中，也沒有過夜放置的需求和必要，因而逡逑在顯色反應后１邋ｈ內(nèi)進行檢測是一個比較寬裕且合適的選擇（Ａ／Ａ0＞邋９９％）。逡逑；Ｍａ￣逡逑０邐０．５邐１邐２邐４邐６邐８邐１０邐１２逡逑Ｔｉｍｅ邋（ｈ）逡逑圖２．１顯色反應穩(wěn)定時間分析逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ｃｏｌｏｒ－ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｓｔａｂｉｌｉｔｙ邋ｔｉｍｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ逡逑２．２．３反應時間確定逡逑為確定不同方法的最佳反應時間，我們?nèi)⊥粯悠�，分別用三種方法分析。逡逑ＵＶ法在啟動反應后的第０、１、２、５、１０、１５、２０、２５、３０邋ｍｉｎ分別測定Ａｍｏ；逡逑ＮＢＴ邋法在開始孵育的第邋５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０邋ｍｉｎ逡逑分別測定Ａ５９０；邋ＭＢＴＨ法則在開始酶反應后的０、１５、３０、６０、９０、１２０邋ｍｉｎ加逡逑入ＭＢＴＨ鹽酸溶液終止反應，經(jīng)顯色反應后分別測定八６１0。逡逑１２逡逑

可以看到在ＵＶ法中兩個明顯的轉折點，分別是第５邋ｍｉｎ和第２０ｍｉｎ處（圖逡逑２．２Ａ），因而該方法最佳的測定時間應當設定在５邋ｍｉｎ。而ＮＢＴ法，整體呈現(xiàn)出逡逑頭重腳輕的Ｓ型曲線（圖２．２Ｂ）。在最初避光孵育時間不足時，吸光度的增長稍逡逑慢，但適當時間的孵育后，能夠呈現(xiàn)出較好的趨勢（１５－３０ｍｉｎ），而時間過長時逡逑顯色物質(zhì)不夠穩(wěn)定而導致吸光度反而有所下降，故選定２０邋ｍｉｎ最為該方法的最逡逑佳測定點。與ＮＢＴ法的邊反應邊測定相比，ＭＢＴＨ先反應后測定，避免了顯色逡逑物質(zhì)不穩(wěn)定帶來的測定問題，但也出現(xiàn)反應時間過長（超過３０邋ｍｉｎ）時產(chǎn)物并不逡逑線性增加的情況，故設定３０邋ｍｉｎ為最佳時間點（圖２．２邋Ｃ）。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ逡逑ＯＴ邐１．６邐１．Ｓ邋？逡逑Ｉ０４＇邐１0－８．邐／邐１0９－邋Ｚ逡逑７邐：：：／逡逑０邐邐．邐．邐；—邐０邐￣￣Ｉ邐邐邐邐邐邐邐．邐．—邐0邋Ｙ－邐．邐１邐１邐：邐邐邐ｒ－逡逑０邐１０邐２０邐？０邐Ｃ邋２５邐３０邐４５邐６０邐７５邐９０邐０邐２０邐４０邐６０邐８０邐１００邐１２０逡逑Ｔｉｍｅ邋Ｃｍｌｎ）邐Ｔｉｍｅ邋Ｃｗｌｎ）邐Ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑圖２．２三種方法反應時間確定逡逑Ａ：邋ＵＶ；邋Ｂ：邋ＮＢＴ；邋Ｃ：邋ＭＢＴＨ逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｉｍｅ－ｃｏｕｒｓｅ逡逑Ａ：邋ＵＶ；邋Ｂ：邋ＮＢＴ；邋Ｃ：邋ＭＢＴＨ逡逑２．２．４重復性分析逡逑為比較三種方法的重復性優(yōu)良，我們?nèi)¤郑╰/溪蜜柚，記為樣品Ａ）、甜橙逡逑（紐荷爾臍橙

但高度保守，均含有中鏈脫氫酶的三種特征序列：Ｚｎｌ結合區(qū)、Ｚｎ２結逡逑合區(qū)和輔酶結合區(qū)（Ｊｉｎ等，２０１６）。甜橙ＰＤＣ基因僅有兩個，其中逡逑與ＣＷ７ＰＤＣ２親緣關系較近，而ＣｓＰＤＣ２與較同源（圖３．２邋）。兩個ＣｓＰＺ）Ｃ逡逑基因同源性可徸８２°／0，與擬南芥NBｒ／ＷＣ？、的同源性也均在８１％及以上。逡逑對ＣｓｌＤ／／和ＣｓＰＤＣ的亞細胞預測結果顯示，１４個ＣＭＤ／／可能僅位于細胞質(zhì)中，逡逑而ＣｘＰＤＣ則既定位于細胞核中也定位于細胞質(zhì)中。逡逑１９逡逑

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

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本文編號：2751209