【摘要】：香石竹(Dianthus caryophyllus L.)名麝香石竹、獅頭石竹、大花石竹,是石竹科石竹屬多年生草本植物。作為云南省花卉產(chǎn)業(yè)的主要栽培品種之一,它的育種方式主要有以下幾種:香石竹雜交育種、香石竹誘變育種和香石竹分子育種。其中分子育種技術(shù)在跨越種間隔離障礙、加速育種進(jìn)程和獲得新的變異方面是傳統(tǒng)育種技術(shù)所無法比擬的。因此,將分子育種技術(shù)用于觀賞植物育種會(huì)在很大程度上提升植株品質(zhì)和其市場競爭力,是香石竹育種研究的重要目標(biāo)。本研究首先對(duì)香石竹的再生體系和再生選擇壓力進(jìn)行優(yōu)化篩選,再通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將OSDLike基因?qū)氲较闶裼鷤M織中,然后經(jīng)過抗性篩選、PCR檢測得到攜帶目的基因的轉(zhuǎn)基因陽性植株。主要研究結(jié)果如下:1、香石竹三個(gè)品種莖尖和葉片再生體系的優(yōu)化以香石竹的無菌組培苗為材料,優(yōu)化了香石竹'馬斯特'、'珍珠粉'、'羅加特'這三個(gè)品種莖尖和葉片再生體系。結(jié)果表明,同一品種的不同部位外植體材料再生對(duì)TDZ的濃度要求是不同的;不同品種的相同部位外植體材料的再生條件對(duì)TDZ的濃度要求也是有差異的。其中'馬斯特'的莖尖材料適宜再生的TDZ濃度為100mg/L,而葉片材料的再生條件為40mg/L;'珍珠粉'的莖尖材料適宜再生的TDZ濃度為30mg/L,而葉片材料的再生條件為40mg/L;'羅加特'的莖尖材料適宜再生的TDZ濃度為90 mg/L,而葉片材料的再生條件為40 mg/L。2、香石竹Kan選擇壓力的確定以香石竹的無菌組培苗為材料,確定了香石竹'馬斯特'、'珍珠粉'、'羅加特'這三個(gè)品種的Kan選擇壓力,減少了后期檢測的工作量。結(jié)果表明,'馬斯特'在90mg/LKan濃度下生長狀況很差,死亡率大幅增長,適宜作為選擇壓力的濃度;'羅加特'在100mg/L的Kan濃度壓力的脅迫下出現(xiàn)明顯的長勢較差,且植株矮小,葉片發(fā)黃的狀況,適宜作為壓力選擇的濃度。3、三個(gè)香石竹品種的遺傳轉(zhuǎn)化將香石竹的莖尖材料接種在預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)4天,放入攜帶目的基因的農(nóng)桿菌菌液中侵染 25 min,再轉(zhuǎn)入到 MS+TDZ 0.8 mg/L+NAA 0.5 mg/L +AS 30 mg/L的培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)4天,之后轉(zhuǎn)入到MS+TDZ 0.8 mg/L +NAA O.lmg/L +400 mg/L Cef+80 mg/L Kan的培養(yǎng)基上2個(gè)月。待分化出不定芽后轉(zhuǎn)入到MS+NAA 0.1 mg/L+BA 0.1 mg/L+80 mg/L Kan培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代篩選培養(yǎng)。結(jié)果表明,不同品種的抗性篩選的愈傷分化率不同,'珍珠粉'的分化率最高,平均值為45%,'羅加特'的分化率最不穩(wěn)定10%-63%。不同品種的抗性篩選的愈傷再生率也不同,'羅加特'的再生率最高,平均值為87%;'珍珠粉'的最低,平均值為12%。轉(zhuǎn)基因植株提取DNA進(jìn)行PCR檢測之后,陽性植株41株。其中用載體OSDLa-PBI侵染的'馬斯特'品種16株,用載體OSDLb-PBI侵染的'羅加特'品種6株,用載體OSDLc-PBI侵染的'馬斯特'品種18株,用載體OSDLc-RNAi侵染的'羅加特'品種1株。
【圖文】：

香石竹的外植體材料都有不同程度的黃化甚至是枯死。通過表１的數(shù)據(jù)統(tǒng)逡逑計(jì)得到最適宜這三個(gè)品種香石竹的葉片材料再生并形成植株的ＴＤＺ濃度為４０逡逑ｍｇ／Ｌ，，具體生長狀況如圖２。逡逑１２逡逑

外植體材料１０個(gè)，在同一時(shí)間段內(nèi)以相同的方式轉(zhuǎn)接到含有不同ＴＤＺ濃度的篩逡逑選培養(yǎng)基中，并放置到同樣的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。香石竹的葉片材料在不同ＴＤＺ濃逡逑度條件下生長狀況如圖３所示，在４０－１００邋ｍｇ／Ｌ的ＴＤＺ濃度范圍內(nèi)香石竹的外植逡逑體材料都呈鮮綠色或深綠色，生長狀況良好；０－３０ｍｇ／Ｌ的ＴＤＺ濃度范圍內(nèi)，香石逡逑竹的外植體材料都有不同程度的黃化甚至是枯死。通過表１的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)得到最適逡逑宜‘馬斯特’‘珍珠粉’‘羅加特’這三個(gè)品種香石竹的莖尖材料再生并形成植株的逡逑ＴＤＺ濃度是不同的，適宜‘馬斯特’莖尖材料再生的ＴＤＺ濃度為１００ｍｇ／Ｌ：適宜＇珍逡逑珠粉’莖尖材料再生的ＴＤＺ濃度為３０ｍｇ／Ｌ：適宜‘羅加特’莖尖材料再生的ＴＤＺ濃逡逑度為９０邋ｍｇ／Ｌ。具體對(duì)應(yīng)長勢圖片如圖４。逡逑
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S682.19

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2628004